JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:00 min. • July 8th, 2025
Syntaza glikogenu ― kluczowy enzym w syntezie glikogenu ― rozszczepia glukozę difosforanu urydyny lub UDP-glukozę ― cukier nukleotydowy ― na UDP i resztę glikozylu i dodaje uwolniony monomer glukozy do rosnącego łańcucha glikogenu.
Aby oszacować aktywność syntazy glikogenu, zacznij od pobrania mieszaniny reakcyjnej zawierającej glikogen, glukozę UDP, ATP, fosfoenolopirugronian i dinukleotyd nikotynamidoadeninowy lub NADH w probówce. Dodaj difosforan nukleozydu lub NDP, enzym kinazy i koktajl enzymatyczny kinazy pirogronianowej i dehydrogenazy mleczanowej. Wymieszaj zawartość i inkubuj.
Dodaj próbkę zawierającą syntazę glikogenu do probówki, aby zainicjować reakcję enzymatyczną.
Syntaza glikogenu działa na UDP-glukozę, wytwarzając UDP i resztę glikozylu. Enzym pobiera wolny monomer glukozy i włącza go do łańcucha glikogenu mieszaniny reakcyjnej. W obecności ATP kinaza NDP mieszaniny reakcyjnej fosforyluje niewykorzystany UDP, przekształcając go w UTP i generując ADP.
Enzym kinaza pirogronianowa działa na ADP i dodaje fosforan przekazany przez fosfoenolopirogronian mieszaniny reakcyjnej w celu wytworzenia ATP i pirogronianu. Następnie dehydrogenaza mleczanowa przekształca pirogronian
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych