JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:35 min. • July 8th, 2025
Komórki generują niski poziom wolnych rodników podczas procesów metabolicznych.
W stanach patologicznych dochodzi do nadprodukcji wolnych rodników, powodując stres oksydacyjny. Te wolne rodniki atakują wielonienasycone kwasy tłuszczowe w fosfolipidach błony komórkowej w procesie zwanym peroksydacją lipidów. W ten sposób powstają toksyczne produkty utleniania, w tym wodoronadtlenki lipidów i dialdehyd malonowy (MDA), które powodują uszkodzenie błony i śmierć komórki.
Aby wykryć stres oksydacyjny w surowicy ludzkiej in vitro za pomocą testu substancji reagującej z kwasem tiobarbiturowym (TBARS), należy rozpocząć od probówki zawierającej surowicę ludzką potraktowaną związkiem indukującym utlenianie. Leczona surowica składa się głównie z produktów peroksydacji lipidów - MDA i wodoronadtlenków lipidów - wraz z fosfolipidami, lipidami i białkami.
Następnie dodaj dodecylosiarczan sodu (SDS) i wymieszaj, aby rozpuścić lipidy i uwolnić MDA. SDS denaturuje wszelkie zanieczyszczające białka. Dodać odpowiedni bufor kwasowy, a następnie kwaśny kwas tiobarbiturowy (TBA). Inkubować w wysokiej temperaturze.
W kwaśnych warunkach i wysokich temperaturach cząsteczki TBA reagują z MDA, tworząc stabiln
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych