Test oparty na luminescencji do oceny neurotoksyczności badanych związków na neurony
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:00 min. • July 8th, 2025
Wyrost neurytowy – w którym neurony rozwijają projekcje – ma kluczowe znaczenie dla funkcji neuronalnych i regeneracji.
Aby ocenić neurotoksyczne skutki badanych związków sprzyjających wzrostowi neurytów in vitro, należy uzyskać ludzką neuronalną komórkę progenitorową, hNPC, zawiesinę w pożywce różnicowej.
Zasiej komórki w wielodołkowych dołkach płytkowych pokrytych poli-L-lizyną i lamininą, ułatwiając przyczepianie komórek do dna studzienki i wspierając wzrost komórek. Składniki pożywki różnicującej sprzyjają różnicowaniu hNPC w neurony.
Potraktuj jeden zestaw studzienek związkiem testowym promującym wzrost neurytów. Oddziałuje to z neuronami pochodzącymi z hNPC i może indukować wzrost neurytów, bez zakłócania komórkowych procesów metabolicznych i późniejszego stężenia trifosforanu adenozyny, ATP - podstawowego źródła energii komórkowej.
Dodaj jednoetapowy odczynnik zawierający detergenty, enzym lucyferazy i substrat lucyferazy, lucyferynę i inhibitory ATPazy wraz z jonami magnezu i wymieszaj.
Detergenty rozrywają błonę komórkową, powodując lizę komórek i wewnątrzkomórkowe uwalnianie ATP do roztworu. Inhibitory ATPazy hamują uwalnianą endogenną ATPazę, która może zakłócać pomiar A
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych