JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:52 min. • July 8th, 2025
Rozwijające się neurony rozszerzają procesy cytoplazmatyczne ze swoich ciał komórkowych poprzez rozrost neurytów, aby rozwinąć dendryty i aksony, które są niezbędne do komunikacji między neuronami.
Aby zbadać wpływ białka docelowego na wzrost neurytów, należy wziąć płytkę wielodołkową z szkiełkiem nakrywkowym pokrytym poli-D-lizyną u podstawy. Na powierzchni szkiełka nakrywkowego znajduje się przylegająca kultura pierwotnych neuronów korowych pochodzących z embrionalnego mózgu szczura.
Potraktuj neurony mieszanką zawierającą dwa typy plazmidów - plazmid EGFP kodujący wzmocnione białko zielonej fluorescencji i drugi plazmid kodujący białko docelowe w odpowiednim odczynniku do transfekcji.
Odczynnik do transfekcji ułatwia wnikanie plazmidów do komórek.
Po transfekcji oba plazmidy ulegają ekspresji, wytwarzając białka zielonej fluorescencji i białka docelowe. Ekspresja EGFP nadaje zieloną fluorescencję komórkom ulegającym transfekcji.
Białka docelowe o potencjale stymulującym wzrost neurytów inicjują sygnalizację komórkową, która sprzyja reorganizacji cytoszkieletu i prowadzi do rozwoju projekcji neuronalnych i ich rozszerzeń.
Odessać zużyte podłoże i utrwalić komórki paraformaldehyde
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych