Fotometria masowa do badania interakcji antygen-przeciwciało na poziomie pojedynczej cząsteczki

Aby wykryć interakcje antygen-przeciwciało za pomocą fotometrii masowej, najpierw inkubuj pożądane stężenie oczyszczonych antygenów i przeciwciał przez wymagany okres czasu, ułatwiając wiązanie antygen-przeciwciało. Opierając się na stechiometrii wiązania antygenu, regiony paratopowe tych przeciwciał mogą mieć różną liczbę przyłączonych antygenów.

Przepłynąć roztwór zawierający wolne przeciwciała wraz z kompleksami antygen-przeciwciało przez wstępnie zmontowaną komorę przepływową. Przymocuj komorę do stolika mikroskopu fotometru masowego. Następnie skieruj wiązkę lasera przez komorę przepływową, aby uzyskać optymalne obrazowanie.

W zależności od liczby antygenów przyłączonych do każdego przeciwciała zmienia się masa cząsteczkowa kompleksów. Te zmiany masy powodują, że kompleksy rozpraszają światło w różny sposób.

Kompleksy o większych masach cząsteczkowych, w których dwa antygeny są związane z obydwoma paratopami jednego przeciwciała, rozpraszają więcej światła w porównaniu z pojedynczymi kompleksami zawierającymi antygen. Ponadto wolne przeciwciała wykazują najmniejsze rozproszenie światła.

Detektor zbiera rozproszone światło i mierzy jego częstotliwość oraz intensywność. Fotometr