Test biosensoryczny konduktometryczny na bazie β-laktamazy do interakcji białko-białko
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:43 min. • July 8th, 2025
Aby rozpocząć test biosensoryczny konduktometryczny na bazie laktamazy β, weź chip przetwornika z elektrodami roboczymi, licznikowymi i referencyjnymi. Elektroda robocza posiada przewodzącą powłokę polimerową, ułatwiającą unieruchomienie docelowego antygenu. Elektrody odniesienia i przeciwelektrody nie mają tej powłoki polimerowej.
Dodaj roztwór zawierający docelowy antygen na chipie. Inkubować. Antygen zostaje unieruchomiony na powierzchni elektrody roboczej poprzez oddziaływania niekowalencyjne. Umyć w celu usunięcia niezwiązanych antygenów.
Dodaj rozwiązanie blokujące. Białka w roztworze przyczepiają się do niezwiązanych miejsc na elektrodzie roboczej i blokują je.
Dodaj dwufunkcyjne białko chimeryczne do chipa, aby wykryć unieruchomiony antygen. Białko chimeryczne zawiera enzym β-laktamazę – białko bakteryjne odpowiedzialne za oporność na antybiotyki. Enzym jest łączony z nanocząsteczką - N-końcowym zmiennym regionem przeciwciał jednodomenowych.
Podczas inkubacji nanocząsteczka białka wiąże się z unieruchomionym antygenem docelowym. Umyj w celu usunięcia niezwiązanych białek chimerycznych.
Podłącz chip do sterowanego komputerowo multimetru cyfrowego. Dodać roztwór detekcyjny za
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych