Różnicowa kalorymetria skaningowa do badania interakcji DNA aptamer-termolabilny ligand
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 7:16 min. • July 8th, 2025
Różnicowa kalorymetria skaningowa pomaga badać interakcje biomolekuła-ligand poprzez pomiar ciepła wymaganego do denaturacji biomolekuły przy braku i obecności liganda.
Na początek weź odniesienie zawierające wolne aptamery DNA - strukturalne jednoniciowe oligonukleotydy - oraz próbkę zawierającą termolabilne aptamery związane z ligandem. Ligandy stabilizują drugorzędową strukturę aptameru.
Wykonaj skanowanie do przodu, podgrzewając roztwory. Po osiągnięciu temperatury topnienia wolne aptamery ulegają denaturacji.
Stabilizowane ligandem aptamery dysocjują od ligandów i ulegają denaturacji w stosunkowo wyższej temperaturze, powodując wzrost temperatury topnienia w porównaniu z wolnymi aptamerami. W wysokich temperaturach podzbiór ligandów uzyskuje nieodwracalną formę drugorzędową o niskim powinowactwie wiązania.
Następnie należy wykonać skanowanie wsteczne poprzez schłodzenie roztworów w celu odzyskania struktury aptameru. W niższej temperaturze początkowe i przekształcone ligandy w próbce wiążą się z aptamerami.
Podczas drugiego skanowania do przodu aptamery związane ze słabym powinowactwem do przekształconych ligandów dysocjują i ulegają denaturacji w niższej temperaturze niż pocz
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych