JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 8:15 min. • July 8th, 2025
Glikogen, rozgałęziony polimer glukozy, jest rezerwą energii w subkomórkowych przedziałach międzymiofibrylarnych, wewnątrzmiofibrylarnych i podsarkolemmalnych w ludzkich mięśniach szkieletowych.
Aby określić ilościowo subkomórkową dystrybucję glikogenu za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej, TEM, należy uzyskać izolowaną ludzką tkankę mięśni szkieletowych. Utrwalić aldehydem glutarowym, aby zachować strukturę tkanki. Umieść tkankę w roztworze tetratlenku osmu i żelazocyjanku potasu.
Zredukowany kompleks osmowo-żelazocyjankowy wiąże się z grupami hydroksylowymi w glikogenie, poprawiając kontrast cząsteczek glikogenu w mięśniach. Dodatkowo błony i retikulum sarkoplazmatyczne - organelle związane z błoną - ulegają zabarwieniu.
Odwodnić tkankę w rosnących stężeniach etanolu. Zanurz w żywicy, tworząc solidny blok. Uzyskaj ultracienkie odcinki z podłużnie zorientowanymi włóknami mięśniowymi; przenieść na siatki TEM.
Zanurz siatki w octanie uranylu, roztworze metalu ciężkiego. Jony uranylowe wiążą się z ujemnie naładowanymi lipidami i białkami, dzięki czemu mają gęstość elektronów. Barwienie roztworem cytrynianu ołowiu.
Jony ołowiu wiążą się z obszarami zabarwionymi osmem, w tym
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych