JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:47 min. • July 8th, 2025
Wielokrotne fosforylacje w białku polegają na dodawaniu grup fosforanowych do białka w różnych pozycjach, w szczególności na resztach seryny i treoniny.
Aby zidentyfikować wielokrotne fosforylacje w białku, zacznij od rurki zawierającej fosforylowane białka znakowane azotem-15, który pomaga odróżnić wodór amidowy od innych wodorów w białku.
Dodaj wewnętrzny związek referencyjny NMR, aby uzyskać dokładny pomiar względnych częstotliwości rezonansowych. Przenieś mieszaninę do probówki magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR). Włóż rurkę do wirującego otworu i umieść ją w spektrometrze NMR.
Obecność fosforanów wykazuje działanie wycofujące elektrony w fosforylowanych resztach seryny i treoniny. W rezultacie, wodory amidowe fosforylowanych reszt wydają się być odekranowane z mniejszą gęstością elektronów w porównaniu z innymi wodorami amidowymi.
Wodór amidowy o różnym środowisku elektronicznym doświadcza zróżnicowanych pól magnetycznych wokół jąder, osiągając stany niskoenergetyczne.
Zastosuj krótki impuls o częstotliwości radiowej, aby wzbudzić jądra wodoru do wyższego stanu energetycznego o określonej częstotliwości rezonansowej w oparciu o ich środowisko elektroniczne.
Podczas relaksa
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych