Name: Oknowe jaja kurze do badań rozwojowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 1 s
Description: Poznaj metodę przygotowania oknowych jaj kurzych do manipulacji neurobiologicznych, w tym wstrzykniwania barwników i eksploracji in ovo. Technika ta zwiększa przeżywalność zarodków i umożliwia mapowanie losów komórek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. Wyjmij jaja z inkubatora
<ol>
<li>Przechowywać w temperaturze 37°C przy wilgotności względnej ustawionej powyżej 60%.</li>
<li>Wyjąć jaja; obrócić jaja o 90°, tak aby szeroka podstawa znajdowała się w pozycji poziomej.</li>
</ol>
2. Przetarcie jaj w celu sterylizacji
<ol>
<li>Nasącz stos niesterylnej gazy 70% etanolem.</li>
<li>Użyj od dwóch do trzech kawałków gazy, aby zebrać do 5 jaj. Wyrzuć gazę, gdy zostanie zabrudzona.</li>
</ol>
3. Przygotowanie miejsca usuwania albuminy
<ol>
<li>Odetnij i przyklej kawałek plastikowej taśmy 3M o wymiarach 1" x 1" po lewej stronie podstawy, aby zabezpieczyć obszar, z którego będzie pobierana albumina.</li>
</ol>
4. Usuwanie albuminy
<ol>
<li>Używając czubka nożyczek, wykonaj mały otwór na środku taśmy.</li>
<li>Za pomocą strzykawki 10 cc z igłą o rozmiarze 18G i długości 1 cala, powoli wprowadź igłę przez otwór wykonany nożyczkami.</li>
<li>Wprowadź igłę pod kątem 45°C w kierunku dna jaja.</li>
<li>Przechyl igłę w stronę środka i pobierz od 3 do 4 mL białka jaja.</li>
</ol>
5. Okienkowanie
<ol>
<li>Wytnij kawałek plastikowej taśmy o wymiarach 3" x 3" i rozciągnij go tak, aby pasował do górnej części jaja. Rozciągnij narożniki kwadratu wokół zaokrąglonych krawędzi poziomej powierzchni jaj, uważając, aby nie ciągnąć zbyt mocno. Naciągnij taśmę tak, aby ściśle przylegała do powierzchni jaj, bez żadnych zagięć. </li>
<li>Używając ostrych, prostych nożyczek do sekcji o długości 4", wykonaj otwór w dolnym centrum obszaru, w którym umieszczono taśmę. Powoli wprowadź dolne ostrze nożyczek do wnętrza jaja, dbając o to, aby końcówki przylegały do wewnętrznej strony skorupki. Skieruj ostrze w stronę podstawy i powoli zacznij wycinać skorupkę. Kontynuuj wycinanie w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara, zatrzymując się tuż przed osiągnięciem górnego centrum. Wyjmij nożyczki i powtórz czynność w przeciwnym kierunku, aż pozostanie jedynie niewielki fragment przytwierdzonego jaja. Sprawdź, czy jajo jest zapłodnione. Zamknij okienko. </li>
</ol>
6. Zamknięcie, ponowne otwarcie i uszczelnienie jaja.
<ol>
<li>Wytnij kawałek plastikowej taśmy o długości około 2-3" i szerokości 1/2", a następnie zamknij okno tak, aby pasowało ono z powrotem do wyciętego otworu. Pobierz kolejny fragment taśmy o wymiarach 1 x 1" i uszczelnij otwór, przez który odprowadzono zawartość jaja. Użyj pęsety, aby ponownie otworzyć jajo w celu wykonania manipulacji. Gdy będziesz gotowy do przeniesienia jaj z powrotem do inkubatora, wytnij kawałek taśmy wystarczająco duży, aby uszczelnić okno i pokryć całą poziomą powierzchnię jaja.</li>
</ol>

<ol><li>Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).</li>
<li>Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).</li>
<li>Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).</li>
<li>Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).</li>
<li>Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).</li>
<li>Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).</li>
</ol>

Metoda ta umożliwia długie przeżycie po manipulacjach eksperymentalnych. Na przykład badania z wykorzystaniem znakowania barwnikami pozwoliły na przeżycie do etapu E10 lub później w badaniu mapowania losów komórek (1). Ponadto metoda ta była stosowana w badaniach elektroporacji in ovo, które zapewniają zmianę poziomów ekspresji genów i wymagają rozwoju do późniejszych etapów rozwojowych (2-6). Tę technikę tworzenia okna można stosować w połączeniu z każdą procedurą wymagającą przeżycia zarodka po przeprowadzonych manipul...

<table><tbody><tr><td>Inkubator obrotowy</td><td> </td><td>Profi</td><td></td><td>Utrzymywać w temperaturze 37&amp;deg;C przy wilgotności względnej powyżej 60%</td></tr><tr><td>70% EtOH</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>gaza</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>taśma plastyczna 3M</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>strzykawka 10 cc</td><td> </td><td></td><td></td><td>1/jajko</td></tr><tr><td>igły 18G</td><td> </td><td></td><td></td><td>igła 1&amp;#189; cala, 1/strzykawkę</td></tr><tr><td>Nożyce do sekcji</td><td> </td><td></td><td></td><td>ostre proste ostrza 4&quot;</td></tr><tr><td>Zapłodnione jaja</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr></tbody></table>

wycinanie okienka w jajach kurzych do badań nad rozwojem

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

Badania nad rozwojem zostały w znacznym stopniu usprawnione dzięki wykorzystaniu zarodka kurczaka jako modelu eksperymentalnego. Łatwy dostęp do zarodka umożliwił przeprowadzenie eksperymentów mających na celu mapowanie losów komórek z zastosowaniem różnych podejść, w tym tworzenia chimery kurcząt i przepiórnic oraz ogniskowego znakowania barwnikami. Ponadto metoda ta pozwala na wprowadzanie zaburzeń molekularnych różnych rodzajów, w tym umieszczanie kulek pokrytych białkami oraz wprowadzanie plazmidowego DNA za pomocą elektroporacji in ovo. Eksperymenty te dostarczyły istotnych danych na temat rozwoju ośrodkowego i obwodowego układu nerwowego. W wielu z tych badań konieczne jest otwarcie skorupy jaja i ponowne jej zamknięcie bez zakłócania wzrostu zarodka. Zarodek można badać w kolejnych etapach rozwoju poprzez ponowne otwieranie skorupy. Choć istnieje kilka doskonałych metod otwierania jaj kurzych, w niniejszym artykule prezentujemy jedną z nich, która została zoptymalizowana pod kątem długiego czasu przeżywalności. W tej metodzie jajo spoczywa na boku, a w skorupie wycina się niewielkie okno. Po wykonaniu procedury eksperymentalnej skorupa służy do przykrycia jaja na czas jego rozwoju. Przezroczysta taśma plastikowa nałożona na skorupę chroni zarodek i pomaga utrzymać nawodnienie podczas pozostałej części okresu inkubacji. Metoda ta była stosowana od drugiego dnia inkubacji i pozwoliła na przeżycie zarodków aż do późnych etapów rozwoju embrionalnego.

Łatwy dostęp do zarodka umożliwił przeprowadzenie eksperymentów mapujących losy komórek przy użyciu kilku podejść, w tym chimer kurczaka i przepiórki oraz ogniskowego znakowania barwnikiem. W niniejszym artykule przedstawiamy metodę przygotowania jaja, która została zoptymalizowana pod kątem długiego czasu przeżycia.

Wycinanie okienka w jajach kurzych do badań nad rozwojem

Badania nad rozwojem zostały w znacznym stopniu wspomagane przez wykorzystanie embrionu kurczaka jako modelu eksperymentalnego. Łatwość dostępu do embrionu...

Witamy w laboratorium Kramera. Jestem Matt Korn z wydziału neurobiologii i behawiorystyki na Uniwersytecie Kalifornijskim w Irvine. Dzisiaj pokażę Państwu, jak przygotować jaja kurze do różnych manipulacji, w tym do umieszczania kulek, wstrzykiwania barwników lub badań in ovo.Zatem, bez dalszych formalności, przejdźmy do działania. Teraz oczyścimy jajo. Powodem jest fakt, że w inkubatorze może znajdować się wiele zanieczyszczeń.Uszczelnimy to za pomocą taśmy. Chcemy uniknąć przedostawania się drobnych fragmentów w miejsce, w którym okno zostanie wycięte w jajku, aby nie zwiększać ryzyka obumarcia zarodka do momentu, w którym będziemy chcieli go wyjąć. Jak widzieliście w inkubatorze, jajka leżą stroną szerszą do góry.Teraz obrócimy jajko na bok. Dzięki temu osiągniemy dwie rzeczy: po pierwsze, nasze okno będzie znajdować się tutaj, a po drugie, zarodek wypłynie na powierzchnię, co umożliwi nam wykonanie jakichkolwiek manipulacji.W związku z tym przeniosę kilka jaj z racka, który znajdował się w inkubatorze, do tekturowego uchwytnika na jaja. Jest to element, który znajduje się w pudełku podczas dostawy jaj. Dzisiaj wykorzystamy go po prostu do podtrzymania jaj.Teraz sposób ułożenia

windowing-chicken-eggs-for-developmental-studies

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Okna w jajach kurczyc dla badań rozwojowych

Opisano podejście do analizy migracji i ostatecznego losu ptasich komórek grzebienia neuronalnego w embrionach chimerycznych przepiórnik-kurczak. Metoda ta stanowi prostą i przejrzystą technikę śledzenia komórek grzebienia neuronalnego podczas migracji i różnicowania, których w przeciwnym razie trudno byłoby odróżnić w niezmodyfikowanym embrionie kurczaka.

Analiza migracji i różnicowania grzebienia neuronalnego za pomocą transplantacji międzygatunkowej

W tym filmie opisujemy technikę otwierania skorupki zapłodnionego jaja kurzego w celu odsłonięcia jego błony kosmówkowo-omoczniowej lub CAM niosącego sieć rozgałęzionych naczyń krwionośnych. Odsłonięty CAM może być stosowany do modelowania guza w ovo.

Okienkowanie jaj: metoda otwierania zapłodnionej skorupki jaja kurzego w celu odsłonięcia naczyń naczyniowych błony moczowo-omoczniowej

Oglądanie i dostęp do zarodka kurczaka podczas rozwoju może być wyzwaniem. Opracowaliśmy metodę ex ovo, która jest prosta, opłacalna i może być łatwo stosowana w klasie lub w środowisku badawczym. Metoda ta zapewnia dostęp do zarodka w późnych stadiach rozwoju zarodkowego (HH 40).

Zoptymalizowana hodowla ex-ovo zarodków piskląt do zaawansowanych etapów rozwoju

Ten protokół opisuje trzy metody pozyskiwania i wykorzystywania zarodków kurczaków w wieku od 5 do 8 dni oraz ich błony kosmówkowo-omoczniowej (CAM) jako modelu in vivo do badania obrazowania ultrasonograficznego z kontrastem i dostarczania leków za pośrednictwem mikropęcherzyków.

Przygotowanie zarodków ex ovo kurczaków i naczyń błony moczowo-omoczniowej jako modelu in vivo do obrazowania ultrasonograficznego ze wzmocnieniem kontrastowym i badań nad dostarczaniem leków za pośrednictwem mikropęcherzyków

To jest skuteczna metoda do wykrywania supresorów lub czynników powodujących przerzuty raka. Komórki, transdukowane biblioteką ekspresji, są wstrzykiwane do układu naczyniowego błony kosmówkowo-omoczniowej kurczaka w celu utworzenia kolonii przerzutowych. Kolonie o zmniejszonej lub zwiększonej inwazyjności są wycinane, namnażane, ponownie wstrzykiwane w celu potwierdzenia ich fenotypu, a na koniec analizowane przy użyciu sekwencjonowania o wysokiej przepustowości.

Odkrycie regulatorów przerzutów przy użyciu szybkiego i ilościowego modelu błony nazębiowej przyżyciowej kurcząt

Kurze zarodki, jako klasyczny model rozwojowy, są używane w naszym laboratorium do oceny kardiotoksyczności rozwojowej po ekspozycji na różne zanieczyszczenia środowiska. Metody ekspozycji i metody oceny morfologicznej/funkcjonalnej zostały opisane w niniejszym manuskrypcie.

Wykorzystanie zarodka kurzego jako potężnego narzędzia w ocenie kardiotoksyczności rozwojowej

Opracowano solidną metodologię do przeprowadzania badań nad żywieniem in ovo z wykorzystaniem nieinkubowanych komercyjnych jaj brojlerów w celu sprawdzenia zdolności naturalnych i syntetycznych związków, w tym przypadku rybozydu nikotynamidu, do wpływania na rozwój i wzrost mięśni.

In Ovo Karmienie komercyjnych jaj brojlerów: dokładna i powtarzalna metoda wpływania na rozwój i wzrost mięśni

Test nasiąkniętych kulek polega na ukierunkowanym dostarczeniu odczynnika testowego w dowolnym momencie rozwoju w celu zbadania regulacji różnicowania i morfogenezy komórek. Przedstawiono szczegółowy protokół, mający zastosowanie do każdego doświadczalnego modelu zwierzęcego, dotyczący przygotowania trzech różnych rodzajów namoczonych koralików i wszczepienia ich w komórkę międzypalcową zarodka kurczaka.

Analiza różnicowania komórek, morfogenezy i wzorcowania podczas embriogenezy kurczaka przy użyciu testu z namoczonymi kulkami

Użyliśmy standardowych technik słuchowej reakcji pnia mózgu (ABR) i zastosowaliśmy je do piskląt piskląt, przedwcześnie rozwiniętego ptasiego modelu funkcji słuchowych. Protokół szczegółowo opisuje techniki przygotowania zwierząt i pozyskiwania ABR, wraz z krokami, które mogą przełożyć się na inne modele ptaków lub gryzoni.

Ocena słuchowej odpowiedzi pnia mózgu u piskląt kurcząt

Pisklę jest opłacalnym, dostępnym i szeroko dostępnym organizmem modelowym do różnych badań. W tym miejscu szczegółowo opisano szereg protokołów, aby zrozumieć mechanizmy molekularne leżące u podstaw rozwoju i regeneracji ucha wewnętrznego ptaków.

Metody in ovo i ex ovo do badania rozwoju ucha wewnętrznego ptaków

Poznaj metodę przygotowania oknowych jaj kurzych do manipulacji neurobiologicznych, w tym wstrzykniwania barwników i eksploracji in ovo. Technika ta zwiększa przeżywalność zarodków i umożliwia mapowanie losów komórek.

Wycinanie okienka w jajach kurzych do badań nad rozwojem

Przeglądaj więcej filmów