Izolacja magnetyczna mikrogleju z mózgów młodych myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:45 min. • July 8th, 2025
Mikroglej – makrofagi rezydujące w mózgu – eksprymują CD11b, integrynę na powierzchni komórki.
Aby wyizolować mikroglej z mózgów młodych myszy, należy pobrać fragmenty mózgu w probówkach dysocjacyjnych zawierających bufor z papainą, enzymem proteolitycznym i dezoksyrybonukleazą.
Umieść rurki na dysocjatorze mechanicznym. Podczas biegu dysocjator mechanicznie rozrywa tkankę.
Papaina trawi macierz zewnątrzkomórkową tkanki, uwalniając komórki, w tym mikroglej, do zawiesiny. Deoksyrybonukleaza rozkłada wolne DNA w zawiesinie, zapobiegając nieefektywnej izolacji komórek.
wirówka. Zakończ dysocjację mechaniczną, pipetując. Przenieś zawiesinę przez sitko komórkowe w celu usunięcia zanieczyszczeń i grudek komórek i uzyskania jednorodnej populacji pojedynczych komórek.
Inkubować z mikrokulkami superparamagnetycznymi funkcjonalizowanymi przeciwciałami anty-CD11b. Mikrogranulki specyficznie wiążą się z CD11b na komórkach, w tym mikrogleju.
Po inkubacji, wirówka. Usunąć szwadron zawierający niezwiązane kulki. Ponownie zawieś komórki w buforze. Załadować na kolumnę umieszczoną na separatorze magnetycznym. Kolumna składa się z matrycy z kulkami ferromagnetycznymi.
Po umieszczeniu na separatorze,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych