Technika wytwarzania cząstek podobnych do wirusa grypy przez system ssaków

Cząsteczki wirusopodobne lub VLP naśladują strukturę wirusa, ale brakuje im materiału genetycznego wirusa, co czyni je niezjadliwymi. VLP posiadają związane z powierzchnią epitopy antygenowe rozpoznawane przez komórki odpornościowe, co czyni je idealnymi kandydatami na szczepionki.

Aby wygenerować rekombinowane VLP grypy, weź eukariotyczne wektory ekspresyjne.

Dwa wektory zawierają geny kodujące hemaglutyninę (HA) i neuraminidazę (NA) – białka strukturalne wirusa grypy. Trzeci wektor zawiera gen gag, kodujący białka rdzeniowe ludzkiego wirusa niedoboru odporności.

Dodać kationowy odczynnik do transfekcji na bazie lipidów. Dodatnio naładowana lipidowa grupa głowa oddziałuje z ujemnie naładowanym DNA, tworząc dwuwarstwę wokół wektorów - generując kompleksy transfekcji liposomów.

Dodaj kompleksy do hodowanych komórek gospodarza ssaków odpowiednich do produkcji VLP i inkubuj. Kompleksy transfekcyjne dostają się do komórek przez endocytozę - błona liposomowa łączy się z błoną endosomu, aby uwolnić wektory do cytoplazmy.

Wektory dostają się do jądra, prowadząc do ekspresji genów wirusa. Podczas syntezy HA i NA na retikulum endoplazmatycznym białka przemieszczają się do błony plazmatyczne