Name: Kaniulacja ślinianki podżuchwowej myszy przez przewód Whartona (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Naucz się kaniulacji ślinianki podżuchwowej myszy przez przewód Whartona z użyciem roztworu trypan blue. Ta metoda umożliwia dostarczanie komórek macierzystych do gruczołu ślinowego w badaniach nad regeneracją.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy są wdzięczni dr Ana Cotrim za konsultacje techniczne oraz dr Monzur Murshed za udostępnienie sprzętu. Praca ta została częściowo sfinansowana przez Canadian Institutes for Health Research.

1. Opis procedury
<ol>
	<li>Wstrzyknij podskórnie każdemu myszy 1 μl / g masy ciała 0,5 mg / ml siarczanu atropiny monohydratu (Kat# 11330, Fluka, USA), aby zapobiec wydzielaniu śliny, która mogłaby zakłócić wprowadzanie infuzji.</li>
	<li>Zanestezuj każdą mysz, wstrzykując domięśniowo (I.P.) 1 μl / g masy ciała roztworu zawierającego 100 mg / ml ketaminy i 20 mg / ml ksylazyny (Phoenix Scientific, AR, USA).</li>
	<li>Umieść mysz w pozycji brzusznej na specjalnie wykonanej plastikowej platformie: siekacze szczękowe zostają zablokowane na metalowym drucie, a siekacze żuchwowe zaczepione o elastyczną sznurówkę w celu utrzymania otwartej jamy ustnej.</li>
	<li>Użyj strzykawki insulinowej z igłą 29G (Kat# 600145, Tyco Healthcare, MA, USA) umieszczonej wewnątrz rurki polietylenowej o średnicy 0,58 mm (Kat# 427410, Becton Dickinson, MD, USA; Rys. 2). Rurka polietylenowa jest nasunięta na 5 mm końcówkę igły 29G. Igła służy jako sztywny prowadnik do wprowadzenia rurki polietylenowej do przewodu Whartona. Rurkę polietylenową wprowadza się na 3-5 mm do wnętrza przewodu. Należy pamiętać, że do przewodu ślinowego wnika tylko rurka polietylenowa, podczas gdy igła pozostaje poza przewodem. Wstrzyknij 50ul przefiltrowanego 0,4% roztworu barwiącego błękitu trypanu (Kat# 15250, Gibco, USA) do gruczołu podżuchwowego przez przewód Whartona, znajdujący się bezpośrednio pod językiem. Infuzję podaje się jednostajnie, wywierając dodatni nacisk na tłok strzykawki; palec pozostaje na tłoku nawet po podaniu całej infuzji do gruczołu, aby zapobiec cofaniu się roztworu do jamy ustnej. Roztwór błękitu trypanu został użyty w materiale wideo jako barwnik w celu zademonstrowania techniki.</li>
	<li>Po wstrzyknięciu roztworu błękitu trypanu mysz została poddana eutanazji przed sekcją. Gruczoł ślinowy zostaje chirurgicznie odsłonięty, aby określić, jaka ilość infuzji faktycznie pozostała w gruczole.</li>
</ol>
2. Reprezentatywne wyniki:
Po wstrzyknięciu infuzji dokonano sekcji myszy, aby chirurgicznie odsłonić kaniulowaną śliniankę. Jak pokazano na Obrazie-2, ciemne zabarwienie przewoduna Whartona świadczy o prawidłowym przeprowadzeniu infuzji roztworu błękitu trypanu.
<img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig1.jpg" alt="Sekcja gryzonia pokazująca gruczoł ślinowy; konfiguracja proceduralna w badaniu z zakresu anatomii weterynaryjnej." data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1. Kanulacja gruczołu podżuchwowego myszy.
<img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig2.jpg" alt="Sekcja biologiczna, części oznaczone jako B i C, identyfikujące struktury anatomiczne." data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2. Rurka polietylenowa jest nasunięta na końcówkę igły o rozmiarze 29G. Igła strzykawki służy jako sztywny prowadnik do wprowadzenia rurki polietylenowej do przewodu Whartona. Rurka polietylenowa jest wprowadzana (kaniulowana) na głębokość 3-5 mm do wnętrza przewodu. Należy zwrócić uwagę, że do przewodu ślinowego wprowadzana jest wyłącznie rurka polietylenowa, podczas gdy igła pozostaje poza przewodem.

<ol><li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+salivary+dysfunction.+Drugs+and+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation.</a> Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).</li>
<li>Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%3A+pathophysiology%2C+prevention+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol+%28R+Coll+Radiol%29%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment.</a> Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).</li>
<li>Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersed+donor+salivary+gland+cells+are+widely+distributed+in+the+recipient+gland+when+infused+up+the+ductal+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree.</a> Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).</li>
</ol>

Wszystkie eksperymenty zostały zatwierdzone przez Uniwersytecką Komisję ds. Opieki nad Zwierzętami i przeprowadzono je zgodnie z wytycznymi Kanadyjskiej Rady ds. Opieki nad Zwierzętami (Canadian Council on Animal Care).

Trudnością przy stosowaniu tej metody kanulacji jest zapobieganie cofaniu się wstrzykniętego roztworu. Nawet jeśli roztwór błękitu trypanowego pomyślnie przeniknął tymczasowo do ślinianki, wydzielanie śliny może zakłócić infuzje i spowodować cofnięcie się roztworu błękitu trypanowego z gruczołu. W ramach środków ostrożności, oprócz zastosowania atropiny w celu zahamowania wydzielania śliny, kaniula polietylenowa powinna pozostać w przewodzie Wharton'a, a tłok strzykawki należy trzymać przez 60 sekund po podaniu infuzji. ...

<table><tbody><tr><td>Atropina</td><td>Lek</td><td>Fluka</td><td>11330</td><td>Do hamowania wydzielania śliny</td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Lek</td><td>Phoenix Scientific</td><td></td><td>Sedacja</td></tr><tr><td>Ksylazyna</td><td>Lek</td><td>Phoenix Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rurka polietylenowa (średnica 0,58 mm)</td><td>Rurka</td><td>Intramedic</td><td>427410</td><td>Do nałożenia na końcówkę igły w celu uniknięcia uszkodzenia tkanek podczas wprowadzania do przewodu Whartona&amp;rsquo;s.</td></tr><tr><td>Strzykawka insulinowa Ultra Comfort (z igłą 29G)</td><td>Strzykawka</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>600145</td><td></td></tr><tr><td>4% błękit trypanowy</td><td>Barwnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15250</td><td></td></tr></tbody></table>

kaniulacja ślinianki podżuchwowej myszy poprzez przewódna whartonowski

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Ciężka niedoczynność ślinianek często występuje u pacjentów z zespołem Sjögrena oraz u osób poddawanych terapeutycznemu napromieniowaniu obszaru głowy i szyi w ramach leczenia nowotworów. Obie grupy pacjentów doświadczają takich objawów jak kserostomia (suchość w ustach), dysfagia (zaburzenia żucia i połykania), ciężka próchnica zębów, zaburzenia smaku, infekcje jam ustnej i gardła (kandydoza), zapalenie błony śluzowej, ból oraz dyskomfort.
Jedno z innowacyjnych podejść medycyny regeneracyjnej w leczeniu niedoczynności ślinianek zostało zaproponowane przez RS Redman, E Mezey 
et al. 2009: komórki macierzyste mogą być wprowadzane bezpośrednio do ślinianki poprzez kaniulację, co stanowi skuteczną metodę przywracania funkcji uszkodzonego narządu. Przypuszcza się, że migrujące obce komórki macierzyste zróżnicują się w komórki gruczołowe, aby funkcjonować jako część ślinianki gospodarza. Ponadto technika kaniulacji ta jest szybką i skuteczną metodą dostarczania w klinicznych zastosowaniach transferu genów.
W niniejszym materiale przedstawiamy etapy procedury kanulacji podżuchwowego gruczołu ślinowego myszy poprzez przewódna Wharton (Ryc. 1). W eksperymencie wykorzystano myszy szczepu C3H (Charles River, Montreal, QC, Kanada), utrzymywane w standardowych warunkach czystości w centrum zasobów zwierzęcych Uniwersytetu McGill. Wszystkie eksperymenty zostały zatwierdzone przez Uniwersytecki Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i przeprowadzono zgodnie z wytycznymi Kanadyjskiej Rady ds. Opieki nad Zwierzętami.
W tym doświadczeniu roztwór błękitu trypanu jest wprowadzany do gruczołu przez ujście przewodu Whartona za pomocą strzykawki insulinowej z igłą 29G umieszczoną wewnątrz rurki polietylenowej. Następnie mysz jest sekowana, aby wykazać, że infuzje skutecznie przedostały się do gruczołu.

Opisano protokół kaniulacji ślinianki podżuchwowej myszy poprzez przewód Whartona. W tym eksperymencie roztwór błękitu trypanowego został użyty jako barwnik, aby zademonstrować, w jaki sposób technika ta skutecznie dostarcza infuzje do docelowej ślinianki oraz aby wykazać niezawodność tego nowego podejścia jako potencjalnej klinicznej terapii lekowej lub komórkowej w regeneracji ślinianek.

Kaniulacja ślinianki podżuchwowej myszy poprzez przewódna Whartonowski

Ciężka hipofunkcja ślinianek często występuje u pacjentów z zespołem Sjögrena oraz u osób poddawanych terapeutycznemu napromieniowaniu w obrębie ich...

Wszystkie eksperymenty zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami Uniwersytetu McGill i są zgodne z wytycznymi Kanadyjskiej Rady ds. Opieki nad Zwierzętami. Celem tego eksperymentu jest wprowadzenie komórek progenitorowych lub macierzystych do ślinianki podżuchwowej myszy poprzez kaniulację przewodu Whartona. W tym filmie roztwór błękitu trypanu został użyty jako barwnik w celu wizualizacji infuzji komórek.Niedoczynność ślinianek jest jednym z najczęstszych skutków ubocznych zespołu Sjögrena oraz terapeutycznego napromieniowania w leczeniu nowotworów obszaru głowy i szyi. Dysfunkcja ślinianek często prowadzi do chorób stomatologicznych, takich jak infekcje błony śluzowej jamy ustnej oraz próchnica zębów. Jednym z innowacyjnych podejść medycyny regeneracyjnej w leczeniu uszkodzonych ślinianek jest następująca metoda.Komórki macierzyste mogą być bezpośrednio wprowadzane do gruczołu poprzez kanulację przewodów ślinowych, co stanowi skuteczną metodę przywracania funkcji uszkodzonego gruczołu; prawdopodobnie zmigrowane obce komórki macierzyste zróżnicują się w komórki gruczołowe, aby pełnić funkcję części gruczołu ślinowego. W niniejszym materiale przedstawiamy kolejne etapy procedury kanulacji podżuchrowego gruczołu ślinowego myszy poprzez przewód Whartona. W tym doświadczeniu roztwór błękitu trypanu jest wstrzykiwany do gruczołu przez otwarcie przewodu Whartona przy użyciu strzykawki z igłą typu ultra comfort o rozmiarze 29G.Następnie mysz zostaje poddana sekcji, aby wykazać, że infuzje skutecznie przedostały się do gruczołu. Krok pierwszy: każdemu zwierzęciu podskórnie wstrzykuje się 1 µL na gram masy ciała roztworu siarczanu atropiny monohydratu o stężeniu 0,5 mg/mL, aby zapobiec wydzielaniu śliny, która mogłaby zakłócić przemieszczanie się infuzji. Krok drugi: każdemu zwierzęciu doprzewnowo wstrzykuje się 1 µL na gram masy ciała roztworu zawierającego 100 mg/mL ketaminy i 20 mg/mL ksylazyny w celu sedacji myszy.Krok trzeci. Po przeprowadzeniu sedacji mysz umieszcza się na platformie. W pozycji brzusznej siekacz szczękowy zostaje zablokowany na metalowym drucie, a siekacz żuchwy zostaje zaczepiony o elastyczną nitkę, aby utrzymać pysk otwarty.Krok czwarty: przy użyciu igły Ultra Comfort 29 G i strzykawki przefiltrowany 0,4% roztwór błękitu trypanu jest wstrzykiwany do ślinianki podżuchwowej poprzez przewódna Wartona, który znajduje się bezpośrednio pod językiem. Igła jest skierowana w stronę ujścia przewodu Wartona i wnika do jego wnętrza w celu podania infuzji. Krok piąty.Bezpośrednio po procedurze kanulacji chirurgicznie odsłania się gruczoł ślinowy, aby określić, jaka część infuzji pozostała w gruczole. Po wstrzyknięciu infuzji mysz została poddana sekcji w celu chirurgicznego odsłonięcia kanulowanego gruczołu ślinowego. Jak widać na tym obrazie, ciemne zabarwienie przewoduna Whartonna stanowi silny dowód na to, że roztwór błękitu trypanowego został pomyślnie wprowadzony w przypadku hipofunkcji gruczołu ślinowego.Miejscowe zastosowanie, a mianowicie wstrzykiwanie leków i komórek za pomocą tej procedury kaniulacji, może być postrzegane jako bardziej bezpośredni i skuteczny sposób przywracania funkcji ślinianek przyusznych, podżuchrowych i podjęzykowych. Jak wynika z reprezentatywnych wyników, infuzje, w tym przypadku roztwór Trian blue, zostały pomyślnie wprowadzone do podżuchrowej ślinianki myszy poprzez przewód Whartona. W związku z tym technika kaniulacji ta może być wykorzystana jako wiarygodny model w medycynie regeneracyjnej ślinianek myszy.W perspektywie przyszłości procedura ta może okazać się przydatną metodą w zastosowaniach klinicznych transferu genów. Byłoby wielką przyjemnością, gdyby ten artykuł wizualny posłużył jako efektywne narzędzie dla studentów i badaczy zainteresowanych dalszymi studiami nad medycyną regeneracyjną gruczołów ślinowych.

cannulation-mouse-submandibular-salivary-gland-via-wharton-s

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Kaniulacja ślinianki podżuchwowej myszy przez przewód Whartona

Ten film demonstruje technikę kanniulacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów. Metoda ta umożliwia bezpośredni dostęp do całej objętości składników obecnych w płynie limfatycznym.

Kaniulacja krezki limfatycznej w modelu szczura w celu pobrania płynu limfatycznego

Mikroskopia przyżyciowe to potężne narzędzie, które umożliwia obrazowanie różnych procesów biologicznych u żywych zwierząt. W tym artykule przedstawiamy szczegółową metodę obrazowania dynamiki struktur subkomórkowych, takich jak ziarnistości wydzielnicze, w gruczołach ślinowych żywych myszy.

Mikroskopia przyżyteczna do obrazowania struktur subkomórkowych u żywych myszy wykazujących ekspresję białek fluorescencyjnych

Niedoczynność gruczołów ślinowych, główny niekorzystny efekt radioterapii głowy i szyi obniża jakość życia pacjenta. Wykazanie skuteczności nowych terapii na modelach zwierzęcych jest warunkiem wstępnym przed przejściem klinicznym. Protokół ten opisuje podawanie wsteczne i miejscowe napromienianie gruczołów podżuchwowych szczura.

Zaporodowe wkraplanie gruczołu podżuchwowego i miejscowe frakcjonowane napromienianie w szczurzym modelu niedoczynności śliny

Opisujemy protokół chirurgicznego odsłaniania i stabilizacji mysiego podżuchwowego gruczołu ślinowego do obrazowania przyżyciowego za pomocą pionowej mikroskopii przyżyciowej. Protokół ten można łatwo dostosować do innych gruczołów zewnątrzwydzielniczych okolicy głowy i szyi myszy i innych małych gryzoni.

Przygotowanie mysiego śliniaka podżuchwowego do pionowej mikroskopii przyżyciowej

Miejscowe dostarczanie leków do gruczołów podżuchwowych jest interesujące dla zrozumienia biologii gruczołów ślinowych i dla rozwoju nowych terapii. Przedstawiamy zaktualizowany i szczegółowy protokół iniekcji retrodukcyjnej, zaprojektowany w celu poprawy dokładności podawania i odtwarzalności eksperymentalnej. Przedstawione w niniejszym artykule zastosowanie polega na dostarczaniu nanocząstek polimerowych.

Wsteczne wstrzyknięcie nanocząstek do mysiego gruczołu podżuchwowego

Przedstawiamy szczegółowe podejście do pobierania śliny, w tym mysią tracheostomię i izolację trzech głównych gruczołów ślinowych.

Ocena funkcjonalna śliny myszy za pomocą stymulacji pilokarpiną po frakcjonowanym promieniowaniu

Celem tego manuskryptu jest opisanie mikrochirurgicznych kroków wymaganych do przeprowadzenia heterotopowego przeszczepu krtani u myszy. Zaletami tego mysiego modelu w porównaniu z innymi zwierzęcymi modelami przeszczepu krtani są jego opłacalność oraz dostępność testów i danych immunologicznych.

Heterotopowy model myszy do badania przeszczepu krtani

W obecnym protokole, funkcja bariery śródbłonkowej gruczołu podżuchwowego (SMG) została oceniona poprzez wstrzyknięcie różnych molekularnych znaczników fluorescencyjnych do żył kątowych badanych modeli zwierzęcych in vivo pod dwufotonowym laserowym mikroskopem skaningowym.

In vivo (in vivo) Wykrywanie przepuszczalności naczyń krwionośnych w mysim gruczole podżuchwowym

Obrazowanie immunofluorescencyjne jest ograniczone przez możliwość obserwacji złożonych, zależnych od czasu procesów biologicznych w zaledwie jednej migawce w czasie. Badanie to przedstawia podejście do obrazowania na żywo przeprowadzone na precyzyjnie wyciętych wycinkach gruczołu podżuchwowego myszy. Takie podejście pozwala na obserwację w czasie rzeczywistym interakcji komórka-komórka podczas homeostazy oraz procesów regeneracji i naprawy.

Badanie interakcji komórka-komórka w gruczole ślinowym za pomocą obrazowania żywych komórek ex vivo

Naprawa tętnicy wewnątrzszyjnej w modelu mysim po wstrzyknięciu przywraca przepływ krwi do tętnicy bez negatywnego wpływu na dystrybucję wstrzykniętego materiału. Naprawa miejsca wstrzyknięcia ułatwia kolejne wstrzyknięcia przez tę samą tętnicę i zapobiega niedokrwieniu mózgu u szczepów myszy, które nie mają pełnego koła Willisa.

Ułatwienie powtórnych iniekcji do tętnicy szyjnej w modelach mysich za pomocą nowatorskiej techniki naprawy miejsca wstrzyknięcia

Ten eksperymentalny protokół demonstruje głęboki model szczura z kaniulowaniem przewodów wędrowych szyjnych, który umożliwia bezpośrednią i ilościową ocenę drenażu limfatycznego z okolic głowy. Model umożliwia szczegółową analizę substancji rozpuszczonych pochodzących z ośrodkowego układu nerwowego (OUN), populacji komórek odpornościowych oraz dystrybucję i oczyszczanie terapii ukierunkowanych na OUN.

Model szczura z kanulacją przewodu limfatycznego szyjnego do oceny transportu limfatycznego z głowy i mózgu

Naucz się kaniulacji ślinianki podżuchwowej myszy przez przewód Whartona z użyciem roztworu trypan blue. Ta metoda umożliwia dostarczanie komórek macierzystych do gruczołu ślinowego w badaniach nad regeneracją.

Kaniulacja ślinianki podżuchwowej myszy poprzez przewódna Whartonowski

Przeglądaj więcej filmów