Monitorowanie aktywacji limfocytów B za pomocą liposomów antygenowych przy użyciu testu strumienia wapnia
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:54 min. • July 8th, 2025
Weź splenocyty zubożone w krwinki czerwone w buforze zawierającym wrażliwy na wapń barwnik fluorescencyjny Indo-1 AM.
Wewnątrzkomórkowe esterazy rozszczepiają Indo-1 AM na nieprzepuszczalny dla błony Indo-1, który wiąże się z jonami wapnia, zmieniając sygnał fluorescencji Indo-1 z niebieskiego na fioletowy.
Wprowadź przeciwciała specyficzne dla antygenu sprzężonego z fluoroforem, które wiążą się specyficznie z odpowiednimi antygenami na komórkach.
Za pomocą cytometrii przepływowej zidentyfikuj limfocyty B znakowane fluoroforem i zmierz ich stosunek fluorescencji fioletowo-niebieskiej Indo-1.
Teraz potraktuj komórki antygenowymi liposomami zawierającymi fragmenty IgM Fab sprzężone z dwuwarstwami liposomów.
Receptory komórek B wiążą się z antygenami sprzężonymi z liposomami, aktywując związane z nimi cytoplazmatyczne kinazy tyrozynowe i wyzwalając aktywację gamma-2 fosfolipazy-C.
Aktywowana fosfolipaza-C rozszczepia błonę fosfolipid, fosfatydyloinozytol 4,5-bisfosforan, wytwarzając drugie przekaźniki, w tym inozytol 1,4,5-trifosforan lub IP3.
IP3 wiąże się z kanałami wapniowymi bramkowanymi IP3 na retikulum endoplazmatycznym, uwalniając jony wapnia do cytoplazmy.
Te jony wapnia wiążą
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych