Wykorzystanie fluorescencji immuno-RNA Hybrydyzacja in Situ do wizualizacji SARS-CoV-2

Weźmy utrwalone i przepuszczalne komórki Vero zakażone koronawirusem - linię komórkową ssaków z niedoborem interferonu.

Wewnątrz gospodarza wirusowe RNA jest obecne w postaci subgenomowych lub sgRNA, cząsteczek RNA o średniej długości kodujących określone białka wirusowe syntetyzowane przez transkrypcję.

Dodaj sondy reakcji łańcuchowej hybrydyzacji lub sondy inicjujące HCR.

Sonda HCR wiąże się ze swoją komplementarną sekwencją na docelowym RNA.

Wprowadź fluorescencyjnie znakowane oligonukleotydowe sondy do włosów, H-1 i H-2.

Sonda inicjująca wiąże się ze swoim komplementarnym ogonem H1, linearyzując strukturę spinki do włosów.

Odsłonięta sekwencja H1 wiąże się z komplementarnym ogonem H2.

Ciągnąca się sekwencja H2 kontynuuje wiązanie się z ogonem H1, wzmacniając sondy znakowane fluorescencyjnie wokół obszaru docelowego i generując silny sygnał.

Dodaj odpowiednie przeciwciała, aby uwidocznić cytoszkielet komórki gospodarza.

Wybarwić jądra za pomocą DAPI.

Pod mikroskopem fluorescencyjnym komórki zakażone wirusem wykazują czerwoną fluorescencję w cytoplazmie, wskazując na obecność docelowego RNA.

Po utrwaleniu i przepuszczalności komórek, zgodnie z opisem w manuskrypcie tekstowym, usu