Barwienie immunohistochemiczne do wykrywania antygenów wirusa wścieklizny

Zacznij od szkiełka zawierającego utrwalony w formalinie, zatopiony w parafinie wycinek tkanki mózgowej myszy zakażony wirusem wścieklizny. Stały odcinek zatrzymuje antygeny wirusowe poprzez sieciowanie białek.

Potraktuj szkiełko roztworem ksylenu, aby usunąć parafinę.

Zanurz szkiełko w zmniejszającym się stężeniu etanolu, aby nawodnić tkankę, dzięki czemu będzie ona kompatybilna z roztworami wodnymi.

Wprowadzenie buforu zawierającego proteazę w celu przerwania wiązań krzyżowych białek, poprawiając dostępność antygenu.

Zanurz się w nadtlenku wodoru, aby zablokować endogenne peroksydazy i zastosuj roztwór blokujący, aby zapobiec niespecyficznym interakcjom.

Wprowadzić przeciwciała pierwszorzędowe specyficzne dla antygenu wścieklizny, tworząc kompleksy antygen-przeciwciało.

Dodaj biotynylowane przeciwciała drugorzędowe, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi. Inkubować z enzymami peroksydazy sprzężonej ze streptawidyną, które oddziałują z biotyną.

Wprowadzić substrat peroksydazy, wytwarzając purpurowo-czerwony osad.

Przeciwbarwić tkankę barwieniem jądrowym, a następnie środkiem niebieszczącym, barwiąc jądra na niebiesko.

Obraz immunohistochemiczny ujawnia purpurowo-czerwo