Test do analizy cyklu komórkowego limfocytów T CD8+ specyficznych dla antygenu
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 6:20 min. • July 8th, 2025
Weź wtórne komórki narządów limfatycznych od myszy immunizowanej antygenem, zawierające specyficzne dla antygenu limfocyty T CD8 + na różnych etapach cyklu komórkowego.
G1, S, G2 i M są etapami aktywnie dzielących się komórek, podczas gdy komórki w stadium G0 są w stanie spoczynku.
Dodaj fluorescencyjny barwnik żywotności, aby oznaczyć martwe komórki i przeciwciała znakowane fluoroforem wiążące się z markerami powierzchniowymi limfocytów T CD3 i CD8.
Wprowadź sprzężone z fluoroforem antygenowe multimery peptydowe-MHC do wiązania receptorów limfocytów T, znakując limfocyty T specyficzne dla antygenu.
Za pomocą bufora utrwal i przepuszczalność komórek.
Wprowadź przeciwciała znakowane fluoroforem, aby związać białko jądrowe związane z proliferacją komórek - barwiąc aktywnie dzielące się komórki.
Dodaj barwnik fluorescencyjny, aby oznaczyć DNA.
Za pomocą cytometrii przepływowej wybierz żywe komórki i zidentyfikuj specyficzne dla antygenu limfocyty T CD8 + za pomocą etykiet związanych z powierzchnią.
Intensywność barwienia DNA odróżnia komórki G0 i G1 o mniejszej ilości DNA od komórek S,G2 i M o większej ilości DNA. Brak przeciwciała specyficznego dla białka jądrowego oddziela komórki G
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych