Ocena skuteczności przeciwwirusowego związku testowego za pomocą testu inaktywacji wirusa

Weź probówki z rekombinowanym wirusem zapalenia wątroby typu C lub zawiesiną HCV zawierającą RNA kodujące wydzielany reporter lucyferazy.

Dodać badany związek przeciwwirusowy i rozpuszczalnik do probówek testowych i kontroli ujemnej.

Badane związki wiążą się z glikoproteinami HCV, inaktywując wirusa.

Po inkubacji rozcieńczyć mieszaniny, aby zapobiec interakcjom związek-komórka w kolejnych etapach.

Dodaj te rozcieńczone mieszaniny do monowarstw wątrobiaka wspierających replikację HCV. Inkubować.

Inaktywowany związkiem HCV nie może przyłączać się do określonych receptorów na powierzchni komórki, podczas gdy aktywne glikoproteiny HCV wiążą się z tymi receptorami, ułatwiając przyłączanie komórek.

Usunąć niezaabsorbowane HCV. Przemyć buforem i dodać pożywkę. Inkubować przez dłuższy czas.

Związany HCV jest internalizowany, uwalniając wirusowe RNA i prowadząc do syntezy białek wirusowych i lucyferazy wydzielanych z komórki.

Zbierz supernatanty hodowlane zawierające lucyferazy. Odwirować i dodać substrat lucyferazy do supernatantów.

Lucyferazy utlenia podłoże, emitując światło.

Wyższa luminescencja w studzience kontrolnej niż w teście wskazuje na inaktywację wirusa przez związek.

Aby rozpo