Metoda mikromiareczkowania na płytkach do oceny minimalnego stężenia hamującego antybiotyku
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:16 min. • July 8th, 2025
Weź płytki do mikromiareczkowania zawierające seryjnie rozcieńczany antybiotyk aminoglikozydowy. Jedna z płytek zawiera NTBC, syntetyczny narkotyk.
Wprowadź Pseudomonas aeruginosa, bakterię Gram-ujemną i inkubuj.
Bakterie wytwarzają pyomelaninę – ochronny pigment zewnątrzkomórkowy – w studzienkach nieleczonych NTBC, podczas gdy lek zapobiega produkcji pyomelaniny.
Antybiotyk kationowy wiąże się z anionowymi lipopolisacharydami lub LPS na zewnętrznej błonie bakteryjnej, przemieszczając mostki kationowe i destabilizując błonę.
Po dostaniu się do bakterii antybiotyk wiąże się z miejscem aminoacylu lub miejscem A w podjednostce rybosomalnej 30S.
Związany antybiotyk zapobiega wiązaniu aminoacylo-tRNA i przemieszczaniu się rybosomów przez mRNA, zakłócając syntezę białek i hamując wzrost bakterii.
Po inkubacji zmierz gęstość optyczną kultury, aby ocenić wzrost bakterii.
Najniższe stężenie antybiotyku, które zapobiega rozwojowi bakterii, to minimalne stężenie hamujące lub MIC.
Podobne wartości MIC dla studzienek poddanych działaniu NTBC i niepoddanych działaniu NTBC wskazują na brak wpływu NTBC na wrażliwość bakterii na antybiotyki.
Na jeden dzień przed testem MIC należy przygotować kultur
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych