Test wykorzystania ATP do określania przeżywalności bakterii w przypadku leczenia antybiotykami
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:56 min. • July 8th, 2025
Zacznij od wysiewu kultury bakteryjnej na płytce testowej. Następnie inkubuj płytkę.
Komórki bakteryjne mają zrosty powierzchniowe i pilusy, które umożliwiają im przyleganie do siebie, tworząc małe agregaty.
Dodaj różne stężenia antybiotyków do studzienek, pozostawiając jeden nieleczony w celu kontroli.
Cząsteczki antybiotyku wchodzą w interakcje z wrażliwymi bakteriami, wpływając na ich zdolność do wzrostu i rozmnażania, prowadząc do ich śmierci.
Bakterie oporne na antybiotyki pozostają aktywne metabolicznie, wytwarzając cząsteczki ATP.
Użyj sonikatora, aby rozbić komórki bakteryjne, uwalniając ich zawartość wewnątrzkomórkową, w tym ATP.
Dodaj odczynnik jarzeniowy wykorzystujący ATP zawierający lucyferynę, enzym lucyferazy i inne kofaktory.
Lucyferazy wykorzystuje ATP i tlen do przekształcenia lucyferyny w wzbudzoną oksylucyferynę.
Oksylucyferyna następnie przechodzi do stanu podstawowego, emitując światło luminescencyjne.
Zmierzyć absorbancję za pomocą czytnika płytkowego.
Spadek absorbancji przy wyższych stężeniach antybiotyków sugeruje niższą produkcję ATP, co wskazuje na zmniejszoną przeżywalność bakterii.
Zmierz gęstość optyczną przy 650 nanometrach lub OD650, aby określić st
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych