Test komórkowy do oceny wychwytu białka tau przez mikroglej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:22 min. • July 8th, 2025
Zacznij od wielodołkowej płytki o płaskim dnie, zawierającej przylegający mysi mikroglej - komórki fagocytarne w mózgu.
Wprowadzić pożywkę bez surowicy zawierającą immunokompleksy. Kompleksy te składają się z przeciwciał przyłączonych do fosforylowanych agregatów białka Tau, które powstają podczas niektórych chorób neurodegeneracyjnych.
Agregaty Tau są znakowane wrażliwym na pH zielonym barwnikiem fluorescencyjnym.
Podczas inkubacji te immunokompleksy oddziałują z receptorami Fc komórek mikrogleju, ułatwiając ich pochłanianie.
Ten endosom zawierający immunokompleks łączy się z lizosomem, tworząc endolizosom. Kwaśne środowisko endolizosomu powoduje fluoryzację cząsteczek barwnika.
Umyć w celu usunięcia niezinternalizowanych immunokompleksów.
Potraktuj roztworem trypsyny-EDTA, aby odłączyć komórki.
Przenieś zawiesinę komórkową na dolną płytkę w kształcie litery U umieszczoną nad lodem, aby ustabilizować endolizosom. Osadzać komórki i wyrzucać supernatant.
Umyj i ponownie zawieś ogniwa za pomocą buforu FACS.
Za pomocą FACS zidentyfikuj pojedyncze żywe komórki i określ ilościowo intensywność zielonej fluorescencji, aby ocenić wychwyt Tau przez mikroglej.
W pierwszym dniu eksperymentu n
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych