Name: Zmodyfikowana technika podwiązania tętnic wieńcowych u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-29T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: Poznaj zmodyfikowaną technikę podwiązania tętnicy wieńcowej u myszy w celu wywołania zawału serca. Ta metoda pozwala badaczom oceniać funkcję serca po zawale i testować nowe terapie kardiologiczne.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. Tekst protokołu
<ol>
	<li>Przed przystąpieniem do zabiegu znieczulić samca myszy (C57BL/6) w wieku 6 tygodni lub starszego poprzez inhalację 2-5% izofluranu. Wykonać ucisk palca stopy, aby potwierdzić, że zwierzę jest odpowiednio znieczulone.</li>
	<li>Nieprzytomną mysz ułożyć na plecach na ciepłej podkładce w celu utrzymania stałej temperatury 37 °C. Wygolić klatkę piersiową w okolicy przedsercowej po lewej stronie.</li>
	<li>Zabezpieczyć mysz w urządzeniu do intubacji z komorą wypełnioną izofluranem. Wprowadzić do tchawicy myszy przez pysk rurkę o średnicy wewnętrznej 0,2, następnie umieścić intubowaną mysz w aseptycznym polu operacyjnym (temp. 37 °C utrzymywana przez regulator temperatury) i podłączyć rurkę endotrachealną do respiratora (częstotliwość 120 na min, ciśnienie 4-6 mmH2O); zdezynfekować obszar betadyną i 75% etanolem.</li>
	<li>Nanieść maść oftalmiczną na oczy myszy. Umieścić standardowe elektrody EKG na łapach i podłączyć mysz do rejestratora EKG.</li>
	<li>Za pomocą sterylnych nożyczek wykonać nacięcie o długości 1,5 cm wzdłuż linii środkowo-pachowej. Nożyczki stosuje się zamiast skalpela, aby uniknąć uszkodzenia leżących głębiej tkanek u myszy. Następnie, używając nożyczek naczyniowych z tępym czubkiem, rozdzielić i odsunąć mięsień przedsercowy od ściany klatki piersiowej.</li>
	<li>Wykonać lewostronną torakotomię między trzecim a czwartym żebrem, aby uwidocznić przednią powierzchnię serca i lewe płuco.</li>
	<li>Dalej odsunąć ścianę klatki piersiowej za pomocą odpowiedniego rozwieracza w celu poprawy widoczności i dostępności. Usunąć osierdzie, używając pęsety z ząbkami i nożyczek z tępym czubkiem.</li>
	<li>Przewiązać lewą tętnicę wieńcową, umieszczając igłę (z nicią Ethilon 7-0) pod tętnicą, tak aby między ligaturą a tętnicą znajdował się pas mięśnia sercowego. Prawidłowe zamknięcie tętnicy wieńcowej weryfikuje się poprzez hipokinezę/akinezę przedniej ściany lewej komory oraz zmiany w zapisie EKG (np. uniesienie odcinka ST, poszerzenie zespołu QRS).</li>
	<li>Zamknąć klatkę piersiową, zakładając dwa szwy (nić Ethilon 6-0) na trzecim i czwartym żebrze.</li>
	<li>Użyć nici Ethilon 5-0 do zamknięcia skóry.</li>
	<li>W celu przeciwbólowego leczenia pooperacyjnego podać pojedynczy zastrzyk buprenorfiny (0,05 mg/kg) dootrzewnowo. Zwierzęta odzyskają przytomność samoistnie w ciągu 2-5 min po zaprzestaniu znieczulenia izofluranem. Na koniec umieścić mysz w ciepłej klatce i zapewnić 0,6 mg/ml buprenorfiny w wodzie pitnej, aby zapobiec stresowi pooperacyjnemu. Przez pierwsze 24 godziny po operacji ściśle monitorować stan myszy.</li>
	<li>W celu oceny funkcji serca 3 dni po zawale mięśnia sercowego wykonać echokardiografię. Prawidłowy przebieg procedury potwierdza akineza przedniej ściany lewej komory (patrz dołączony film w sekcji Wyniki). Na koniec eksperymentu pobrać serce i przechowywać w temperaturze -80 °C do dalszych badań, tj. analizy ekspresji genów.</li>
</ol>

<ol><li>Tabrizchi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-blocker+therapy+after+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev.+Cardiovasc.+Ther%22%5BJournal%5D)">Beta-blocker therapy after acute myocardial infarction.</a> Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 11, 293-296 (2013).</li>
<li>Pell, S., Fayerweather, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+the+incidence+of+myocardial+infarction+and+in+associated+mortality+and+morbidity+in+a+large+employed+population%2C+1957-1983%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Trends in the incidence of myocardial infarction and in associated mortality and morbidity in a large employed population, 1957-1983.</a> N. Engl. J. Med. 312, 1005-1011 (1985).</li>
<li>Ramunddal, T., Gizurarson, S., Lorentzon, M., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiarrhythmic+effects+of+growth+hormone--in+vivo+evidence+from+small-animal+models+of+acute+myocardial+infarction+and+invasive+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Electrocardiol%22%5BJournal%5D)">Antiarrhythmic effects of growth hormone--in vivo evidence from small-animal models of acute myocardial infarction and invasive electrophysiology.</a> J. Electrocardiol. 41, 144-151 (2008).</li>
<li>Thom, T., Haase, N., Rosamond, W., Howard, V. J., Rumsfeld, J., Manolio, T., Zheng, Z. J., Flegal, K., O'Donnell, C., Kittner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2006+update%3A+A+report+from+the+american+heart+association+statistics+committee+and+stroke+statistics+subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2006 update: A report from the american heart association statistics committee and stroke statistics subcommittee.</a> Circulation. 113, 85-151 (2006).</li>
<li>van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse%3A+A+comparison+with+coronary+artery+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, 1291-1300 (2005).</li>
<li>Omerovic, E., Ramunddal, T., Lorentzon, M., Nordlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+neuropeptide+y2+receptor+blockade+on+ventricular+arrhythmias+in+rats+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of neuropeptide y2 receptor blockade on ventricular arrhythmias in rats with acute myocardial infarction.</a> Eur. J. Pharmacol. 565, 138-143 (2007).</li>
<li>Ahn, D., Cheng, L., Moon, C., Spurgeon, H., Lakatta, E. G., Talan, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarcts+of+a+predictable+size+and+location+by+branch+pattern+probability-assisted+coronary+ligation+in+c57bl%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in c57bl/6 mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1201-1207 (2004).</li>
<li>Lindbom, M., Ramunddal, T., Camejo, G., Waagstein, F., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+effects+of+myocardial+creatine+depletion+on+left+ventricular+function+morphology+and+lipid+metabolism%3A+Study+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Card+Fail%22%5BJournal%5D)">In vivo effects of myocardial creatine depletion on left ventricular function morphology and lipid metabolism: Study in a mouse model.</a> J. Card Fail. 14, 161-166 (2008).</li>
<li>Omerovic, E., Bollano, E., Basetti, M., Kujacic, V., Waagstein, L., Hjalmarson, A., Waagstein, F., Soussi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic%2C+functional+and+morphological+consequences+of+postinfarct+cardiac+remodeling+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic, functional and morphological consequences of postinfarct cardiac remodeling in the rat.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 31, 1685-1695 (1999).</li>
<li>Gao, E., Lei, Y. H., Shang, X., Huang, Z. M., Zuo, L., Boucher, M., Fan, Q., Chuprun, J. K., Ma, X. L., Koch, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+and+myocardial+infarction+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse.</a> Circ. Res. 107, 1445-1453 (2010).</li>
</ol>

Nie zgłoszono żadnych konfliktów interesów.

Procedura chirurgiczna podwiązania LCA przedstawiona w niniejszym raporcie jest niezawodną i powtarzalną metodą indukcji eksperymentalnego MI u myszy3, 6. Podwiązanie LCA zgodnie z tym protokołem wywołuje niedokrwienie mięśnia sercowego obejmujące zazwyczaj ~40% lewej komory3. Powoduje to istotne zmiany w odcinku ST w EKG7 oraz widoczną bladość na przedniej powierzchni serca. Ze względu na rozległość zawału mięśnia sercowego śmiertelność może wynosić do 30%8, 9. Należy zauważy...

zmodyfikowana technika ligacji tętnicy wieńcowej u myszy

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Zawał mięśnia sercowego (MI) jest jedną z najważniejszych przyczyn śmiertelności u ludzi1-3. Aby zmniejszyć zachorowalność i śmiertelność u pacjentów z MI, niezbędna jest lepsza wiedza na temat patofizjologii niedokrwienia mięśnia sercowego. Wiedza ta może być cenna przy definiowaniu nowych celów terapeutycznych dla innowacyjnych terapii sercowo-naczyniowych4. Eksperymentalny model MI u myszy jest coraz popularniejszym modelem zwierzęcym w badaniach przedklinicznych, w którym MI indukuje się poprzez trwałe lub tymczasowe podwiązanie lewej tętnicy wieńcowej (LCA)5. W niniejszym filmie opisujemy krok po kroku metodę indukcji eksperymentalnego MI u myszy.
Zwierzę zostaje najpierw znieczulone 2% izofluranem. Następnie nieprzytomnej myszy wykonuje się intubację i podłącza ją do respiratora w celu wentylacji mechanicznej. Lewą stronę klatki piersiowej ogala się i wykonuje 1,5 cm nacięcie skóry wzdłuż linii środkowo-pachowej. Lewy mięsień piersiowy większy jest rozdzielany tępym sposobem aż do odsłonięcia żeber. Warstwy mięśniowe są odsuwane i mocowane za pomocą retraktora powiekowego. Po tych przygotowaniach wykonuje się lewostronną torakotomię między trzecim a czwartym żebrem, aby uwidocznić przednią powierzchnię serca i lewe płuco. Następnie proksymalny odcinek tętnicy LCA zostaje podwiązany szwem ethilon 7-0, co zazwyczaj indukuje obszar zawału stanowiący ~40% lewej komory. Na koniec klatkę piersiową zamyka się, a zwierzęta otrzymują leki przeciwbólowe pooperacyjnie (Temgesic, 0,3 mg/50 ml, ip). Zwierzęta są przetrzymywane w ciepłej klatce do czasu samoistnego wybudzenia.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td> Przyrząd</td>
 <td>Opis funkcji</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Nożyczki z tępymi końcami </td>
 <td>Służy do przecinania skóry, mięśni międzyżebrowych klatki piersiowej oraz szwów</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Retraktor do powieki</td>
 <td>Służy do odsłonięcia pola operacyjnego</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pinceta z tępymi końcami</td>
 <td>Służy do chwytania skóry i mięśni</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Igłotrzymacz</td>
 <td>Spos...

Procedura chirurgiczna stosowana w celu wywołania eksperymentalnego zawału mięśnia sercowego u myszy rozpoczyna się od lewej torakotomii między trzecim a czwartym żebrem, aby umożliwić wizualizację przedniej powierzchni serca i lewego płuca. Następnie podwiązuje się lewą tętnicę wieńcową, zamyka klatkę piersiową i pozostawia mysz do samoistnego powrotu do sprawności.

Zmodyfikowana technika ligacji tętnicy wieńcowej u myszy

Zawał mięśnia sercowego (MI) jest jedną z najważniejszych przyczyn śmiertelności u ludzi1-3. W celu zmniejszenia zapadalności i śmiertelności u pacjentów z MI...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest wywołanie zawału mięśnia sercowego u myszy. Osiąga się to poprzez wykonanie nacięcia skóry wzdłuż linii pachowej środkowej, a następnie odsłonięcie serca za pomocą lewej torakotomii pomiędzy trzecim a czwartym żebrem.Następnie wykonuje się ligację w proksymalnym odcinku lewej tętnicy wieńcowej zstępującej. Na koniec klatka piersiowa zostaje zamknięta, a mysz umieszczona z powrotem w klatce w celu spontanicznego powrotu do zdrowia. Ostatecznie zawał mięśnia sercowego można zbadać za pomocą elektrokardiografii lub echokardiografii.Wizualna demonstracja tej metody jest kluczowa, ponieważ podwiązanie tętnicy wieńcowej w pobliżu lewej tętnicy głównej jest trudne do opanowania. Odpowiedni zawał mięśnia sercowego zapewnia umieszczenie podwiązania tuż poniżej ujścia lewej tętnicy głównej. Należy jednak pamiętać, aby nie przebić lewej tętnicy głównej, gdyż może to spowodować śmiertelny krwotok.Aby rozpocząć operację, znieczul mysz w wieku sześciu tygodni lub starszą poprzez inhalację 2–5% fluoranem. Wykonaj uszczypnięcie w palec, aby potwierdzić, że zwierzę jest wystarczająco znieczulone. Gdy mysz zostanie całkowicie uspokojona, przenieś ją do obszaru

modified-technique-for-coronary-artery-ligation-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Zmodyfikowana Technika Ligacji Tętnic Wieńcowych u Myszy

W badaniach nad ostrym uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym oraz przewlekłym przebudowywaniem serca u myszy, w wymiarze czasowym nanosi się liczne manipulacje genetyczne i/lub wewnątrzmięśniowe iniekcje genów, białek, komórek i/lub biomateriałów. Niniejsze wideo ilustruje mikrosurgicalne procedury stosowane w badaniach nad niedokrwieniem/reperfuzją, trwałą ligacją tętnicy wieńcowej oraz iniekcjami wewnątrzmięśniowymi.

Podwiązanie tętnicy wieńcowej i wtryskiwanie domięśniowe w mysim modelu zawału

W tym filmie opisujemy zabieg chirurgiczny polegający na wygenerowaniu mysiego modelu zawału mięśnia sercowego poprzez trwałe podwiązanie lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej.

Generowanie mysiego modelu zawału mięśnia sercowego: zabieg chirurgiczny trwałego podwiązania lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej w modelu mysim

Wprowadzamy metodę chirurgiczną do wywoływania eksperymentalnego uszkodzenia niedokrwienia/reperfuzji (I/R) symulującego zawał mięśnia sercowego (MI) w modelach mysich, co pozwala na większą przejrzystość w umiejscowieniu podwiązania na lewej tętnicy zstępującej przedniej (LAD) w celu zwiększenia powtarzalności eksperymentów MI u myszy.

Mysi model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego mięśnia sercowego poprzez podwiązanie lewej tętnicy zstępującej przedniej

Opisano wysoce powtarzalny model zawału mięśnia sercowego u myszy z minimalnymi inwazyjnymi manipulacjami. Model można łatwo wykonać, co skutkuje wysoką odtwarzalnością i wskaźnikiem przeżycia. W związku z tym opisany model zmniejszy liczbę wymaganych zwierząt, zgodnie z zasadą 3R (Replacement, Refinement and Reduction).

Minimalnie inwazyjny zabieg chirurgiczny indukcji zawału mięśnia sercowego u myszy

Niewydolność serca jest główną przyczyną hospitalizacji i główną przyczyną śmiertelności. Model trwałego podwiązania lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej u myszy stosuje się do badania przebudowy komór i dysfunkcji serca po zawale mięśnia sercowego. Przedstawiono technikę inwazyjnych pomiarów hemodynamicznych u myszy.

Trwałe podwiązanie lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej u myszy: model przebudowy po zawale mięśnia sercowego i niewydolności serca

Zapewniamy niezawodną metodę podwiązania lewej przedniej tętnicy zstępującej (LAD) w modelu mysim. Metoda ta jest stosunkowo mniej inwazyjna niż inne metody, obejmujące intubację dotchawiczą, lewostronną torakotomię i toracentezę. Metoda ta może być stosowana jako model zarówno dla ostrego, jak i przewlekłego zawału mięśnia sercowego (MI).

Podwiązanie tętnicy wieńcowej lewej lewej przedniej zstępującej (LAD): ulepszony i uproszczony model zawału mięśnia sercowego

Tutaj opisujemy zabieg chirurgiczny pokazujący, jak osiągnąć trwałe podwiązanie lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej u myszy. Model ten ma duże znaczenie dla badania patofizjologii zawału mięśnia sercowego i towarzyszących mu procesów biologicznych.

Mysi model zawału mięśnia sercowego z wykorzystaniem trwałego podwiązania lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej

Pod odpowiednim znieczuleniem, serce myszy zostało uzewnętrznione przez przestrzeń międzyżebrową, a zawał mięśnia sercowego został skutecznie wywołany przez podwiązanie lewej przedniej tętnicy zstępującej (LAD) przy użyciu materiałów łatwo dostępnych w większości laboratoriów.

Zmodyfikowana prosta metoda indukcji zawału mięśnia sercowego u myszy

Tutaj opisujemy prostą i powtarzalną metodę, która może wywołać zawał mięśnia sercowego lub uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne mięśnia sercowego u myszy poprzez precyzyjne podwiązanie lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej za pomocą mikromanipulacji.

Indukcja zawału mięśnia sercowego i uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego mięśnia sercowego u myszy

Przedstawiono tutaj zabieg chirurgiczny trwałego podwiązania lewej tętnicy wieńcowej u myszy. Model ten można wykorzystać do zbadania patofizjologii i związanej z nią odpowiedzi zapalnej po zawale mięśnia sercowego.

Podwiązanie lewej tętnicy wieńcowej: chirurgiczny mysi model zawału mięśnia sercowego

Poznaj zmodyfikowaną technikę podwiązania tętnicy wieńcowej u myszy w celu wywołania zawału serca. Ta metoda pozwala badaczom oceniać funkcję serca po zawale i testować nowe terapie kardiologiczne.

Zmodyfikowana technika ligacji tętnicy wieńcowej u myszy

Przeglądaj więcej filmów