Metoda in vitro do generowania organoidów ludzkiego mózgu

Zacznij od hodowli neurosfer, swobodnie unoszących się skupisk neuroepitelialnych komórek progenitorowych.

Przenieś te neurosfery na arkusz do osadzania.

Usuń nośnik. Dodaj kroplę macierzy błony zewnątrzkomórkowej zawierającej białka i czynniki wzrostu do każdej neurosfery.

Inkubuj, aby matryca zestaliła się, osadzając w niej neurosfery.

Teraz przenieś neurosfery osadzone w macierzy za pomocą pożywki neurosfery na płytkę hodowlaną zawierającą pożywki neurosferyczne.

Inkubować. Macierz błony zewnątrzkomórkowej i jej składniki ułatwiają różnicowanie neuroepitelialnych komórek progenitorowych w komórki neuronabłonkowe, które proliferują i tworzą wypełnione płynem światła.

Po inkubacji przenieś neurosfery do kolby obrotowej zawierającej wstępnie podgrzane pożywki organoidowe mózgu. Inkubuj z mieszaniem w celu zwiększenia dyfuzji tlenu i składników odżywczych, promując wzrost komórek.

Czynniki wzrostu i inhibitory małych cząsteczek w pożywkach sprzyjają różnicowaniu neuronów i przekształcają się w komórki określonych regionów mózgu, tworząc dojrzałe organoidy mózgowe.

Aby rozpocząć tę procedurę, zbierz neurosfery za pomocą mikropipety o pojemności 200 mikrolitrów, używając 2-milimetrowe