Technika pośredniej kohodowli neuronów i astrocytów do badania interakcji neuron-glej

Zacznij od płytki wielodołkowej zawierającej przepuszczalną wkładkę membranową pokrytą poli-D-lizyną.

Dodaj pożywkę wzrostu astrocytów do studzienki i zasiew astrocytów, wyspecjalizowanej komórki glejowej, do wkładki.

Inkubować, aby umożliwić przyleganie komórek do poli-D-lizyny poprzez oddziaływania elektrostatyczne i utworzyć monowarstwę.

Zastąp pożywkę astrocytów pożywką do hodowli neuronów.

Przenieść tę wkładkę do płytki wielodołkowej zawierającej przylegające pierwotne neurony embrionalne myszy na szkiełku nakrywkowym pokrytym polimerem.

Inkubuj w celu ustanowienia pośredniej kohodowli neuronów i astrocytów, w której dwa typy komórek są fizycznie oddzielone, ale mają tę samą pożywkę hodowlaną.

Astrocyty wydzielają różne czynniki neurotroficzne niezbędne do przetrwania i wzrostu neuronów.

Czynniki te migrują przez przepuszczalne podparcie i oddziałują z neuronami pierwotnymi. Sprzyja to ich różnicowaniu i tworzy projekcje neuronalne.

Projekcje te wydłużają się i ustanawiają połączenia synaptyczne między neuronami, wskazując na interakcje neuron-glej.

Pokryj każdą wkładkę 10 mikrogramami na mililitr poli-D-lizyny i inkubuj przez godzinę. Po godzinie umyj wkładki dwukrotnie PBS.