Hodowla eksplantatów neuronów spiralnych myszy na matrycach wieloelektrodowych

Zacznij od wypreparowanego segmentu ucha wewnętrznego myszy zawierającego spiralny ganglion i narząd Cortiego, wyspecjalizowane struktury ucha wewnętrznego.

Narząd Cortiego zawiera komórki rzęsate, które działają jako receptory sygnałów słuchowych.

Zwój spiralny składa się z ciał komórek neuronów, które wydłużają procesy unerwiania komórek rzęsatych narządu Cortiego.

Oddziel spiralny ganglion od narządu Cortiego i uzyskaj z niego małe skrawki tkanek lub eksplantaty.

Teraz weź układ wieloelektrod pokryty macierzą zewnątrzkomórkową zawierający pożywki hodowlane.

Umieść eksplantaty na matrycy i umieść narząd Cortiego poza obszarem elektrody. Inkubować.

Eksplantaty przyczepiają się do powlekanej powierzchni wieloelektrody.

Regularnie dodawaj pożywki zawierające białka surowicy i czynniki wzrostu.

Podczas hodowli składniki pożywki i narząd Cortiego zapewniają wsparcie neurotroficzne, promując wzrost neurytów z neuronów spiralnych zwojów nad elektrodą wieloelektrodową.

Oddziel narząd Cortiego od zwoju spiralnego w modiolus, przytrzymując podstawową część zwoju spiralnego i narząd Cortiego kleszczami i powoli rozwijając narząd Cortiego od podstawy do wierzchołka. Następnie odetnij boczne eksplantaty ze spiralnego zwoju za pomocą kleszczy lub drobnych nożyczek lub noży do mikrodysekcji.

Teraz przenieś eksplantaty spiralnego zwoju i narząd Cortiego do MEA. Następnie umieść eksplantaty SG w obszarze elektrody i narządu Cortiego, w odległości około 5 milimetrów od obszaru elektrody. Umieść eksplantaty i narząd Cortiego na MEA, unikając uszkodzenia tkanki. Następnie ostrożnie umieść MEA w inkubatorze i kulturze w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% CO₂ .

Następnego dnia sprawdź wzrokowo eksplantaty pod kątem ich przyłączenia do MEA. Następnie dodawaj 100 mikrolitrów pożywki hodowlanej zawierającej 10% FBS i BDNF dziennie przez pięć kolejnych dni. W dniu 6 dodaj 2 mililitry pożywki hodowlanej, zawierającej 10% FBS i 5 nanogramów na mililitr BDNF i hoduj tkankę przez dodatkowe 13 dni.