Generowanie kultury neuronalnej o ultraniskiej gęstości przy użyciu warstwy zasilającej neurony o dużej gęstości

Rozpocząć od dwóch płytek wielodołkowych: jednej z wytrawionym dnem pokrytym polimerem, a drugiej z szkiełkiem nakrywkowym pokrytym polimerem.

Umieść zawiesinę neuronów embrionalnych o dużej gęstości na płytce z wytrawionym dnem. Dodaj zawiesinę neuronów o bardzo niskiej gęstości do dobrze zawierającej szkiełko nakrywkowe.

Inkubuj, aby umożliwić neuronalne przyczepienie się do polimerów.

Usuń szkiełko nakrywkowe i umieść je na kulturze neuronów o dużej gęstości, umożliwiając neuronom zwrócenie się do siebie.

Wytrawiona powierzchnia z wypukłymi strukturami tworzy mikroprzestrzeń, która oddziela neurony o różnej gęstości.

Kultura o dużej gęstości działa jak warstwa zasilająca i wydziela neuronalny czynnik wzrostu.

Ze względu na ograniczoną przestrzeń dyfuzyjną czynniki wzrostu gromadzą się wokół neuronów, ułatwiając ich wzrost i rozwój projekcji neuronalnych.

Wprowadź pożywkę neurobazalną z arabinozydem cytozyny, który selektywnie hamuje wzrost komórek nieneuronalnych.

Regularnie uzupełniaj świeżą pożywką neuropodstawną, aby utrzymać kulturę neuronalną.

W tej procedurze umieść 24-dołkowe płytki z wytrawionym dnem dla neuronów o dużej gęstości w kapturze hodowlanym. Usunąć 300 mikroli