Różnicowanie indukowanych nerwowych komórek progenitorowych w astrocyty

Weźmy hodowlę indukowanych nerwowych komórek progenitorowych lub iNPC na wielodołkowej płytce pokrytej białkiem macierzy zewnątrzkomórkowej.

Zastąp pożywkę pożywką do indukcji glejowej i inkubuj. Czynniki wzrostu i hormony zawarte w pożywce ułatwiają różnicowanie iNPC w komórki prekursorowe gleju.

Zmieniaj pożywkę co drugi dzień w celu proliferacji komórek. Następnie zastąp pożywkę pożywką astrocytów i inkubuj.

Określone składniki odżywcze i czynniki wzrostu w pożywce napędzają różnicowanie komórek prekursorowych gleju w astrocyty.

Zmiana podłoża co drugi dzień sprzyja dojrzewaniu astrocytów.

Zmień pożywkę na pożywkę neuro-diff-pożywkę, gdy komórki są zlewające się w około 70% i kontynuuj zmianę pożywki co drugi dzień przez trzy tygodnie. Nie dziel komórek podczas różnicowania. Po trzech tygodniach komórki powinny wyrażać marker neuronalny TuJ1.

Aby uzyskać bardziej dojrzałe neurony i podtypy neuronów, kontynuuj różnicowanie do trzech miesięcy. W celu różnicowania iNPC specyficznie w kierunku linii glejowej, zmień pożywkę na pożywkę do indukcji glejowej, w tym 20 nanogramów na mililitr naskórkowego czynnika wzrostu, aby indukować różnicowanie w komórki prekursorowe gleju. Usuń poło