Metoda biodruku 3D mysich astrocytów korowych

Weź zawiesinę astrocytów.

Dodaj roztwór biotuszu zawierający żelatynę, fotosieciowalne pochodne żelatyny, fotoinicjatory, fibrynogen i lamininę.

Przenieść zawiesinę do strzykawki z igłą

Schłodzić strzykawkę w celu żelowania biotuszu. Podłączyć strzykawkę do głowicy drukującej biodrukarki.

Umieścić igłę odpowiednio na płytce hodowlanej. Rozpocznij biodruk z ustalonymi parametrami i projektem.

Biotusz zawierający astrocyty jest wypychany z igły i osadza się warstwami na płytce, tworząc trójwymiarową strukturę z uwięzionymi astrocytami.

Wystaw biodrukowaną konstrukcję na działanie światła ultrafioletowego. Fotoinicjator pomaga w sieciowaniu pochodnej żelatyny, zwiększając stabilność biokonstrukcji.

Leczyć trombiną i jonami wapnia.

Trombina, z jonami wapnia, przekształca fibrynogen w fibrynę, łącząc się w stabilną sieć biopolimerów 3D.

Wyrzucić roztwór i przemyć buforem w celu usunięcia środków sieciujących.

Dodaj pożywkę astrocytową i inkubuj. Laminina wspomaga adhezję i rozprzestrzenianie się astrocytów, tworząc tkankę neuronalną 3D bogatą w astrocyty.

Aby uzyskać końcowe stężenie 1 x 10⁶ komórek na mililitr, przenieś 1 mililitr roztworu żelatyny-żelatyny-metakryloilo-fibrynogenu do probówki zawierającej komórki i homogenizuj, delikatnie pipetując w górę iw dół. Użyj pipety o pojemności 1000 mikrolitrów, aby powoli przenieść astrocyty ułożone w roztworze biotuszu żelatynowo-żelatynowo-metakryloylowo-fibrynogenowego do 5-mililitrowej plastikowej strzykawki, unikając tworzenia się pęcherzyków. Podłączyć sterylną igłę w rozmiarze 22 do strzykawki.

Wystaw biodrukarkę na działanie światła UV przez 15 minut, a następnie przetrzyj biodrukarkę 70% etanolem. Następnie podłącz strzykawkę do głowicy drukującej biodrukarki i ręcznie przepłucz biotusz, aby usunąć pozostałe pęcherzyki.

Aby przeprowadzić biodrukowanie, umieść 35-milimetrowe naczynie hodowlane na stole biodrukarki. Umieść igłę w odległości 0,1 milimetra od powierzchni szalki hodowlanej, aby umożliwić ruch igły, a następnie naciśnij przycisk Drukuj. Po zakończeniu bioprintingu upewnij się, że strzykawka odsuwa się od naczynia i zamknij naczynie hodowlane. Umieść naczynie hodowlane w świetle UV w celu sieciowania żelatyny i metakryloilou.

Użyj sterylnej szpatułki, aby przenieść biodrukowany konstrukt na 24-dołkową płytkę, dodaj 500 mikrolitrów roztworu trombiny chlorku wapnia i pozostaw na 30 minut, aby umożliwić sieciowanie fibryny. Po usunięciu roztworu sieciującego umyj konstrukcję 2 mililitrami PBS. Następnie zastąp PBS 1 mililitrem pożywki do hodowli astrocytów. Inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla i zmieniać podłoże co trzy dni.