Metoda wspólnej hodowli do modelowania interakcji neuron-oligodendrocyty
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:26 min. • July 8th, 2025
Weźmy na przykład neurony indukowane przez człowieka lub iN hodowane na macierzy zewnątrzkomórkowej.
Usuń pożywkę i dodaj enzymy trawienne, które rozbijają macierz, dysocjując komórki.
Przenieś iNs do probówki. Odwirować zawiesinę i odrzucić supernatant zawierający enzymy.
Zawiesić iN w pożywce do kohodowli; przenieść je do kultury indukowanych komórek prekursorowych oligodendrocytów lub iOPC.
iOPC są prekursorami oligodendrocytów, które tworzą osłonki mielinowe wokół aksonów neuronów.
Podczas inkubacji iOPC tworzą połączenia synaptyczne z iNs. Czynniki troficzne uwalniane przez iOPC i czynniki wzrostu w pożywce sprzyjają dojrzewaniu iN do neuronów, wykazując zwiększone procesy komórkowe, które tworzą połączenia synaptyczne z innymi neuronami.
Aktywność elektryczna dojrzałych neuronów i czynników wzrostu w pożywce indukuje dojrzewanie iOPC do oligodendrocytów.
Oligodendrocyty wydłużają procesy komórkowe, tworząc osłonki mielinowe wokół aksonów neuronów.
Ugruntowana kokultura jest gotowa do analizy.
W dniu 14 płytkują iOPC o gęstości 1 x 105 komórek na dołek na 24-dołkowej płytce w pożywce różnicującej OPC. Następnego dnia odłącz indukowane ludzkie neurony za pomocą roztworu do odłą
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych