JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:48 min. • July 8th, 2025
Zacznij od fragmentów tkanki pnia mózgu zawierających rozlanego glejaka mostu, guz pochodzący z glejowych komórek progenitorowych w zmielinizowanym środowisku bogatym w nerwy.
Traktuj enzymami proteolitycznymi, aby zdegradować macierz zewnątrzkomórkową tkanki.
Po inkubacji należy kilkakrotnie pipetować zawartość, aby ułatwić dysocjację komórek i degradację osłonki mielinowej.
Przefiltruj i odwiruj, aby zebrać komórki. Usunąć supernatant i ponownie zawiesić je w zimnym buforze.
Dodaj roztwór sacharozy w celu separacji gradientu gęstości i dokładnie wymieszaj.
Następnie odwirować, aby oddzielić cięższe komórki od lżejszych resztek mieliny.
Usuń warstwę mieliny i dodaj bufor do lizy RBC.
Dodaj zimny bufor, aby zatrzymać działanie lizy. Odwirować i usunąć supernatant, aby wyeliminować zlizowane erytrocyty.
Zawiesić komórki w ciepłym podłożu neurobazalnym i hodować je w kolbie bez powłoki.
Brak czynników neurotropowych powoduje śmierć neuronów, podczas gdy komórki progenitorowe gleju wykorzystują składniki odżywcze i czynniki wzrostu, co prowadzi do proliferacji. Dodaj świeżą pożywkę, aby utrzymać poziom czynnika wzrostu.
Z biegiem czasu komórki te spontanicznie agregują się w klastry k
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych