Izolowanie fluorescencyjnie znakowanych neuronów z mysiego mózgu
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:35 min. • July 8th, 2025
Weźmy transgeniczną korę myszy zawierającą neurony wykazujące ekspresję białek fluorescencyjnych.
Zamocuj go na uchwycie na próbkę.
Zamontuj uchwyt na tacce wibratomu zawierającej natleniony aCSF, aby utrzymać warunki fizjologiczne tkanki.
Korzystając z ustawionych parametrów, uzyskaj wycinki koronalne.
Umieść plastry w siatkowym uchwycie zawierającym natleniony aCSF i blokery aktywności, aby je ustabilizować.
Potraktuj plastry proteazami, aby strawić macierz zewnątrzkomórkową i rozluźnić komórki.
Przemyć płynem mózgowo-rdzeniowym, aby usunąć proteazy.
Przenieś plastry na płytkę hodowlaną z CSF i surowicą.
Pod mikroskopem fluorescencyjnym wypreparuj obszary plasterków zawierające neurony fluorescencyjne.
Przenieść wypreparowane fragmenty do probówki zawierającej płyn mózgowo-rdzeniowy i surowicę.
Mechanicznie dysocjuj tkankę, tworząc zawiesinę jednokomórkową. Przenieść komórki na płytkę hodowlaną zawierającą płyn mózgowo-rdzeniowy.
Pod mikroskopem fluorescencyjnym użyj pipety kapilarnej, aby zebrać fluorescencyjne neurony.
Dozuj te neurony do płytki hodowlanej zawierającej CSF w celu dalszej analizy.
Wypreparuj mózg myszy poddanej eutanazji, otwierając czaszkę małymi nożyczkami i w
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych