Izolowanie komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej myszy okołoortowej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:52 min. • July 8th, 2025
Weźmy pobrane transgeniczne tkanki tłuszczowe okołoaortalne myszy zawierające fluorescencyjne komórki macierzyste pochodzące z tkanki tłuszczowej wyrażające białko fluorescencyjne, pochodzące z komórek grzebienia nerwowego lub NCC.
Dodaj pożywkę trawiącą i zmiel tkanki.
Przenieść zmieloną tkankę z pożywką wytrawiającą do probówki. Mechanicznie odciąć fragmenty.
Inkubować. Kolagenaza w pożywce trawi macierz zewnątrzkomórkową tkanki, uwalniając komórki macierzyste, adipocyty i fibroblasty.
Dodaj pożywkę zawierającą surowicę, aby zatrzymać aktywność kolagenazy. Odwirować i wyrzucić supernatant zawierający adipocyty.
Ponownie zawieś komórki w pożywce i przefiltruj, aby usunąć agregaty.
Odwirować filtrat i usunąć sklarowany nad osadem. Ponownie zawiesić komórki w buforze do lizy erytrocytów w celu lizy erytrocytów.
Dodaj bufor zawierający surowicę, aby zatrzymać lizę. Odwirować i wyrzucić supernatant.
Ponownie zawieś komórki w buforze.
Wykonaj sortowanie komórek aktywowane fluorescencją, aby wyizolować fluorescencyjne komórki macierzyste.
Wyizolowane komórki macierzyste mogą być wykorzystane do dalszych eksperymentów.
Przenieś pobraną tkankę tłuszczową do nowej 2-mililitrowej probówki d
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych