Indukcja in vitro połączeń nerwowo-mięśniowych z modyfikowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych indukowanych przez człowieka
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:29 min. • July 8th, 2025
Zacznij od zmodyfikowanych ludzkich iPSC zawierających gen różnicowania mioblastów lub kodujący białko MYOD, indukowany doksycykliną w pożywce komórek macierzystych zawierającej inhibitory kinazy Rho.
Przenieś komórki na płytki pokryte ECM i inkubuj, aby ułatwić przyczepienie komórek.
Tymczasem inhibitor inaktywuje wewnątrzkomórkowe enzymy kinazy Rho, zwiększając żywotność komórek.
Zastąp pożywkę pożywką z komórkami macierzystymi zawierającą doksycyklinę.
Doksycyklina wnika do komórek i wiąże się z białkami aktywującymi. Kompleksy te wiążą się z promotorem, indukując ekspresję genów w niektórych komórkach i wytwarzając białka MYOD, które wyzwalają różnicowanie komórek macierzystych w komórki mięśniowe.
Potraktuj komórki miogennym podłożem różnicującym zawierającym miogenne czynniki różnicowania, aby promować tworzenie miotubek, wielojądrowej komórki mięśniowej.
Później wprowadź pożywkę do indukcji neuronów z neuronalnymi czynnikami wzrostu.
Czynniki te różnicują pozostałe iPSC w neurony ruchowe i komórki Schwanna, które tworzą osłonkę mielinową wokół neuronów.
Na koniec zastąp pożywkę ośrodkiem połączenia nerwowo-mięśniowego, aby promować połączenia między neuronem ruchowym a rurką
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych