Izolacja nerwowych komórek progenitorowych łodygi z obszaru okołokomorowego rdzenia kręgowego dorosłego szczura

0 wyświetleń4:30 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zacznij od tkanki okołokomorowej rdzenia kręgowego dorosłego szczura, regionu bogatego w nerwowe komórki macierzyste / progenitorowe.

Przenieść tkankę do roztworu zawierającego papainę i DNazę.

Papaina, enzym proteolityczny, rozszczepia macierz zewnątrzkomórkową tkanki, podczas gdy DNaza degraduje zanieczyszczające DNA uwolnione z uszkodzonych komórek.

Mechanicznie zdysocjuj tkankę, aby uzyskać zawiesinę jednokomórkową.

Przenieść zawiesinę do probówki i odwirować. Usunąć supernatant. Ponownie zawiesić komórki w roztworze zawierającym białko albuminy i inhibitor proteazy.

Albumina i inhibitor dezaktywują papainę.

Zawiesinę komórkową należy nałożyć na roztwór zawierający albuminę i inhibitor proteazy.

Różnica gęstości między warstwami tworzy nieciągły gradient gęstości.

Wirować, aby osadzić nienaruszone komórki, podczas gdy fragmenty błony komórkowej pozostają na granicy faz.

Odrzucić supernatant. Ponownie zawieś komórki w pożywce wzrostowej i pokryj je płytką.

Czynniki wzrostu selektywnie promują proliferację nerwowych komórek macierzystych / progenitorowych i ich agregację w trójwymiarowe neurosfery.

Aby rozpocząć izolację nerwowych komórek macierzystych szczura, użyj mikronożyczek, aby zmielić wypreparowaną tkankę okołokomorową na kawałki o pojemności 1 milimetra sześciennego. Następnie przygotuj enzymatyczny bufor dysocjacyjny, dodając najpierw 5 mililitrów zbilansowanego roztworu soli Earla do fiolki z papainy z zestawu do dysocjacji papainy.

Umieścić fiolkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza na 10 minut, tak aby papaina całkowicie się rozpuściła, a roztwór wydawał się klarowny. Następnie dodaj 500 mikrolitrów zbilansowanego roztworu soli Earla do fiolki DNazy z zestawu dysocjacyjnego i delikatnie wymieszaj.

Dodać 250 mikrolitrów roztworu DNazy do fiolki zawierającej papainę i delikatnie wymieszać. Następnie dodaj zmieloną tkankę, około 0,2 grama, do fiolki i umieść fiolkę na platformie kołyskowej w temperaturze 37 stopni Celsjusza na 45 minut do jednej godziny.

Po inkubacji rozcierać mieszaninę za pomocą 10-mililitrowej pipety, aby zdysocjować wszelkie pozostałe kawałki tkanki, aby uzyskać mętną zawiesinę komórek. Przenieś zawiesinę komórkową do sterylnej stożkowej probówki o pojemności 15 mililitrów i odwiruj przy 300 g przez 5 minut w temperaturze pokojowej.

Podczas wirowania przygotuj roztwór ovomukoid, mieszając 2,7 mililitra zbilansowanego roztworu soli Earla z 300 mikrolitrami odtworzonego roztworu inhibitora albuminy w stożkowej probówce o pojemności 15 mililitrów. Dodać 150 mikrolitrów uprzednio przygotowanego roztworu DNazy do roztworu ovomukoidu i wymieszać, odwracając probówkę.

Wyrzucić supernatant z granulowanych komórek i natychmiast ponownie zawiesić osad komórkowy w rozcieńczonej mieszaninie DNazy i inhibitora albuminy. Następnie przygotuj nieciągły gradient gęstości, dodając 5 mililitrów roztworu inhibitora albuminy do 15-mililitrowej probówki i za pomocą 5-mililitrowej pipety delikatnie i powoli ułóż zawiesinę komórkową na wierzchu roztworu inhibitora albuminy.

Odwirować próbkę o masie 70 g przez sześć minut w temperaturze pokojowej. Po zakończeniu wyrzuć supernatant i ponownie zawieś osad komórkowy w 1 mililitrze wstępnie podgrzanej pożywki EFH dla szczurów, która jest przygotowana zgodnie z opisem w dołączonym protokole tekstowym.

Policz gęstość żywych komórek za pomocą hemocytometru i umieść komórki w kolbie hodowlanej T25 o gęstości 10 komórek na mikrolitr w EFH. Inkubuj kolby w temperaturze 37 stopni Celsjusza w 5% dwutlenku węgla i pozwól kulturom rosnąć bez zakłóceń przez tydzień, aby uniknąć agregacji kulek.

08:48

Stabilna i wydajna modyfikacja genetyczna komórek dorosłej myszy V-SVZ do analizy autonomicznych i nieautonomicznych efektów neuronalnych komórek macierzystych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:01

Izolacja i hodowla neurosfer mózgowych dorosłych danio pręgowanego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:37

Izolacja i ekspansja prekursorów neuronalnych hipokampa u dorosłych psów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

04:04

Izolacja komórek macierzystych z poporodowego móżdżku myszy i różnicowanie w komórki nerwowe

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:56

Promowanie przeżycia i różnicowania nerwowych komórek macierzystych z koktajlami fibryny i czynnika wzrostu po ciężkim urazie rdzenia kręgowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:27

Hodowla nerwowych komórek macierzystych z konwencjonalnych i niekonwencjonalnych regionów mózgu dorosłego gryzonia

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:52

Jedna mysz, dwie kultury: izolacja i hodowla dorosłych nerwowych komórek macierzystych z dwóch stref neurogennych poszczególnych myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:56

Przeszczepienie nerwowych komórek macierzystych w eksperymentalnym modelu kontuzyjnym uszkodzenia rdzenia kręgowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:26

Izolacja nerwowych komórek macierzystych/progenitorowych z obszaru okołokomorowego dorosłego szczura i ludzkiego rdzenia kręgowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:24

Izolacja i hodowla dorosłych nerwowych komórek macierzystych ze strefy podmodzelowej myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 15 sierpnia 2026