Izolacja nerwowych komórek progenitorowych łodygi z obszaru okołokomorowego rdzenia kręgowego dorosłego szczura
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:30 min. • July 8th, 2025
Zacznij od tkanki okołokomorowej rdzenia kręgowego dorosłego szczura, regionu bogatego w nerwowe komórki macierzyste / progenitorowe.
Przenieść tkankę do roztworu zawierającego papainę i DNazę.
Papaina, enzym proteolityczny, rozszczepia macierz zewnątrzkomórkową tkanki, podczas gdy DNaza degraduje zanieczyszczające DNA uwolnione z uszkodzonych komórek.
Mechanicznie zdysocjuj tkankę, aby uzyskać zawiesinę jednokomórkową.
Przenieść zawiesinę do probówki i odwirować. Usunąć supernatant. Ponownie zawiesić komórki w roztworze zawierającym białko albuminy i inhibitor proteazy.
Albumina i inhibitor dezaktywują papainę.
Zawiesinę komórkową należy nałożyć na roztwór zawierający albuminę i inhibitor proteazy.
Różnica gęstości między warstwami tworzy nieciągły gradient gęstości.
Wirować, aby osadzić nienaruszone komórki, podczas gdy fragmenty błony komórkowej pozostają na granicy faz.
Odrzucić supernatant. Ponownie zawieś komórki w pożywce wzrostowej i pokryj je płytką.
Czynniki wzrostu selektywnie promują proliferację nerwowych komórek macierzystych / progenitorowych i ich agregację w trójwymiarowe neurosfery.
Aby rozpocząć izolację nerwowych komórek macierzystych szczura, użyj mikronożyczek
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych