Przygotowanie jednokomórkowej zawiesiny komórek odpornościowych z mysiej tkanki mózgowej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:51 min. • July 8th, 2025
Zacznij od mysiego mózgu z komórkami neuronalnymi, nieneuronalnymi i odpornościowymi w macierzy zewnątrzkomórkowej mózgu lub ECM.
Zmielić tkankę i ponownie zawiesić ją w pożywce hodowlanej.
Przenieś te fragmenty tkanek do probówki i potraktuj je kolagenazą i enzymami DNazy-I.
Kolagenaza trawi ECM, uwalniając pojedyncze komórki, podczas gdy DNaza-I degraduje wolne DNA, aby zapobiec zlepianiu się komórek.
Następnie dodaj EDTA, aby dezaktywować enzymy kolagenazy.
Dodaj pożywkę hodowlaną. Odwirować i usunąć supernatant.
Dodaj roztwór gradientu gęstości i pożywkę hodowlaną do osadu komórkowego, tworząc warstwę gradientu o niskiej gęstości.
Wymieszaj, a następnie pokryj roztwór roztworem gradientowym o dużej gęstości, aby ustalić różnicę gęstości.
Wirować z niską prędkością, aby oddzielić komórki odpornościowe na granicy faz, z lżejszymi szczątkami komórkowymi na górze i cięższymi komórkami neuronalnymi i glejowymi na dole.
Usuń górną warstwę, zbierz komórki odpornościowe i przenieś je do innej probówki.
Odwirować i usunąć supernatant, a następnie ponownie zawiesić komórki w pożywce, tworząc zawiesinę jednokomórkową do dalszych zastosowań.
Wlej tkankę mózgu lub rdzenia kręgowego z pożywk
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych