Przygotowanie śródbłonka mózgowego z tętniczek miąższowych myszy

Zabezpiecz mózg myszy, brzuszną stroną do góry, w naczyniu pokrytym polimerem silikonowym zawierającym bufor.

Wypreparuj wycinek tkanki z półkuli wokół środkowej tętnicy mózgowej lub MCA, przy czym górny segment tkanki wystaje poza punkt rozgałęzienia od koła Willisa.

Zabezpiecz tkankę tak, aby MCA był skierowany do góry.

Usuń pia mater wraz z tętniczkami, które odgałęziają się od MCA.

Zabezpiecz pia mater z tętniczkami. Wypreparuj tętniczkę i usuń otaczającą tkankę. Odrzuć wszelkie dystalne gałęzie.

Inkubuj tętniczkę w koktajlu enzymów proteolitycznych, aby ułatwić częściowe trawienie segmentu.

Zastąp enzymy buforem i przenieś strawiony segment do komory zawierającej bufor na stoliku mikroskopowym wyposażonym w pipetę do rozcierania.

Kilkakrotnie pipetować tętniczkę, aby usunąć rozluźnioną przydankę i komórki mięśni gładkich, w wyniku czego powstaje nienaruszona rurka zawierająca komórki śródbłonka tętniczki.

Umieść brzuszną stronę mózgu skierowaną do góry w komorze zawierającej zimny roztwór preparacyjny w celu wyizolowania tętniczek miąższowych. Aby wyizolować tętnice miąższowe, zabezpiecz izolowany mózg stalowymi szpilkami i zimnym roztworem preparacyjnym na szalce Petriego zaw