Ustanowienie hodowli komórek glejowych Müllera uzyskanej z siatkówki myszy

Weźmy na przykład siatkówki myszy zawierające komórki glejowe Müllera lub MG i neurony.

Umieść je w roztworze dysocjacyjnym z enzymami trawiennymi i inkubuj z delikatnym kołysaniem, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie enzymów.

Enzymy te rozkładają macierz zewnątrzkomórkową, odrywając poszczególne komórki.

Kilkakrotnie pipetuj siatkówki w górę i w dół, aby uwolnić komórki.

Dodaj inhibitor, aby zatrzymać aktywność enzymu, a następnie odwiruj.

Odrzucić supernatant.

Ponownie zawiesić komórki w pożywce zawierającej czynnik wzrostu specyficzny dla komórek MG.

Przenieś komórki do studzienki i inkubuj.

Z biegiem czasu czynnik wzrostu w pożywce ułatwia wzrost i namnażanie komórek MG, podczas gdy niedzielące się komórki neuronalne giną.

Wyjmij nośnik. Umyć buforem solnym.

Inkubuj z enzymem trawiennym, aby odłączyć komórki od studzienki.

Zbierz komórki w probówce, a następnie odwiruj.

Odrzucić supernatant zawierający martwe komórki nerwowe.

Ponownie zawiesić komórki MG w pożywce w celu dalszej analizy.

Przygotować mieszaninę dysocjacyjną papainy DNazy I zgodnie z opisem w manuskrypcie. Teraz, za pomocą pipety transferowej z powiększoną końcówką, podnieś siatkówki. Poczekaj, aż siatkówki o