Izolacja i hodowla pierwotnych embrionalnych neuronów dopaminowych śródmózgowia myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:04 min. • July 8th, 2025
Weźmy tkankę dna śródmózgowia wyizolowaną z brzusznego obszaru śródmózgowia zarodków myszy.
Tkanka jest bogata w rozwijające się neurony dopaminowe, które uwalniają neuroprzekaźnik dopaminę.
Dodaj roztwór enzymu, aby rozbić macierz tkankową, rozluźniając w ten sposób komórki.
Dodać roztwór surowicy zawierający DNazę I i mechanicznie zdysocjować strawioną tkankę w celu wytworzenia zawiesiny komórkowej. Białka surowicy hamują enzymy, podczas gdy DNaza I degraduje zewnątrzkomórkowe DNA uwalniane podczas lizy komórek, zapobiegając zlepianiu się komórek.
Pozwól resztkom tkanek osiąść i przenieś zawieszone komórki do świeżej probówki.
Odwirować i usunąć supernatant, a następnie ponownie zawiesić komórki w pożywce neuronów dopaminowych lub DPM.
Weź mikropłytkę pokrytą substratem do hodowli komórkowej w środku studzienek, tworząc mikrowyspy.
Przenieś komórki do środka mikrowysp, aby wyhodować je w dużej gęstości.
Inkubuj, pozwalając komórkom przylegać do mikrowysp.
Napełnij studzienki DPM i inkubuj, ułatwiając wzrost neuronów dopaminowych.
Aby skonfigurować pierwotne embrionalne kultury śródmózgowia z zarodków myszy w 13,5 dniu embrionalnym, zbierz wszystkie zebrane podłogi śródmózgowia w
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych