Różnicowanie indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych w neuronalne komórki progenitorowe
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:22 min. • July 8th, 2025
Pobrać mikropłytkę zawierającą przylegającą kulturę mysich fibroblastów embrionalnych lub MEF w pożywce.
Przylegające MEF-y działają jako warstwa zasilająca, zapewniając wspierające mikrośrodowisko hodowli komórkowych.
Usuń pożywkę i wprowadź indukowane przez człowieka pluripotencjalne komórki macierzyste (hiPSC) do pożywki hiPSC uzupełnionej małymi cząsteczkami, które zwiększają przeżywalność komórek.
Inkubuj, aby hiPSC mogły przylegać do warstwy zasilającej, która wydziela czynniki wzrostu ułatwiające proliferację hiPSC.
Usuń pożywkę i dodaj roztwór enzymu, aby odłączyć komórki. Przenieść komórki i odwirować je, a następnie usunąć supernatant i ponownie zawiesić w pożywce hiPSC.
Przenieś komórki na płytkę pokrytą biopolimerem. Inkubuj, aby umożliwić MEF-om przyleganie.
Przenieść zawieszone hiPSC na mikropłytkę z dnem w kształcie litery V. Odwiruj komórki i inkubuj je, indukując tworzenie agregatów komórkowych.
Uzupełnij pożywką różnicującą. Składniki odżywcze pożywki i interakcje komórka-komórka w obrębie agregatu ułatwiają różnicowanie hiPSC w nerwowe komórki progenitorowe.
W przypadku tego protokołu zacznij od ustanowienia komórek zasilających. Aby ustalić tę kulturę, umieść 60
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych