Barwienie immunologiczne tkanek do obrazowania cytometrii masowej

Umieść szkiełko podstawowe z utrwaloną próbką tkanki w buforze do pobierania antygenu i podgrzej je.

Podwyższona temperatura i zasadowe pH buforu przerywają wiązania krzyżowe białek wywołane wiązaniem, odsłaniając epitopy antygenów.

Schłodzić szkiełko, aby zapobiec uszkodzeniom tkanek wywołanym wysoką temperaturą, a następnie spłukać, aby usunąć nadmiar buforu.

Zastosuj barierę hydrofobową i umieść szkiełko w komorze wilgotnościowej.

Dodaj bufor blokujący przenikanie. Detergent zawarty w buforze przenika przez błony komórkowe, a białka blokujące maskują niespecyficzne miejsca wiązania, aby zmniejszyć barwienie tła.

Usuń nadmiar buforu, dodaj koktajl przeciwciał sprzężonych z metalem i inkubuj, aby umożliwić wiązanie przeciwciał ze specyficznymi antygenami.

Umyć szkiełko, usuwając niezwiązane przeciwciała.

Dodaj sprzężone z metalem barwienie jądrowe, które dostaje się do komórek i wiąże się z DNA.

Spłucz nadmiar plamy i osusz szkiełko.

Za pomocą skanera optycznego można uzyskać obrazy o wysokiej rozdzielczości cech strukturalnych tkanki, co pomaga w interpretacji danych z analizy obrazowej cytometrii masowej barwionej próbki.

Rozpocznij od wstępnie potraktowanego wycinka tkanki o gr