JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:05 min • July 8th, 2025
Zacznij od kohodowli neuronów i astrocytów w wielodołkowej matrycy mikroelektrod lub MEA.
Każda studzienka zawiera sieć neuronów pochodzących z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych lub hiPSC. Astrocyty szczurów zapewniają wsparcie w utrzymaniu sieci.
Podstawa studni zawiera siatkę maleńkich elektrod.
Umieść MEA w urządzeniu rejestrującym, aby uchwycić spontaniczną aktywność elektrofizjologiczną sieci neuronalnej.
Wlej nawilżoną mieszaninę gazów do hodowli, aby zapobiec parowaniu pożywki i ustabilizować pH, zapewniając żywotność komórek.
Neurony przekazują sygnały za pomocą impulsów elektrycznych, zwanych potencjałami czynnościowymi, które przemieszczają się wzdłuż ich aksonów.
Po dotarciu do synapsy impuls wyzwala uwalnianie neuroprzekaźników, które propagują sygnał do następnego neuronu.
Elektrody w każdej studzience jednocześnie rejestrują potencjały czynnościowe generowane przez wiele neuronów połączonych synaptycznie.
Spontaniczna aktywność elektrofizjologiczna sieci neuronalnej potwierdza różnicowanie się hiPSC w neurony.
Pozyskaj dane przy 1200-krotnym wzmocnieniu i próbkuj sygnał przy 10 kilohercach za pomocą karty akwizycji danych MCS. Rejestruj 20 minut aktywności elektrofizjologicznej neuronów pochodzących z hiPSC hodowanych na MEA. Podczas rejestracji utrzymuj temperaturę na poziomie 37 stopni Celsjusza i zapobiegaj parowaniu medium i zmianom pH poprzez dostarczanie stałego, powolnego przepływu nawilżonego gazu do MEA. Następnie przeanalizuj dane za pomocą niestandardowego pakietu oprogramowania.