JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:44 min. • July 8th, 2025
Weź pipetę stymulacyjną zawierającą czerwone, niewrażliwe na wapń fluorofory w sztucznym płynie mózgowo-rdzeniowym lub ACSF.
Umieść pipetę w pobliżu docelowego neuronu w wycinku hipokampa.
Umieścić pipetę z elektrodą rejestrującą skąpaną w elektrolicie zawierającym czerwone niewrażliwe na wapń i zielone fluorofory wskaźnika wapnia w pobliżu celu.
Stosuj stałe nadciśnienie, aby na krótko zakłócić powierzchnię tkanki, wskazując bliskość celu.
Gdy dołek tworzy się na błonie neuronalnej, zwolnij ciśnienie, aby utworzyć uszczelnienie.
Zastosuj podciśnienie, aby dokręcić uszczelkę.
Ustabilizować potencjał membrany przy stałym napięciu ujemnym.
Kontynuuj z podciśnieniem, aby przerwać błonę, umożliwiając elektrolitom zawierającym fluorofor rozprzestrzenienie się w neuronach.
Wizualizuj czerwoną fluorescencję docelowego kolca dendrytycznego i ustaw pipetę stymulacyjną w jego pobliżu.
Zastosuj impulsy elektryczne, aby otworzyć kanały wapniowe.
Użyj mikroskopii dwufotonowej, aby uwidocznić przejściowe zmiany poziomu wapnia, na co wskazuje zielona fluorescencja.
Na tym etapie przenieś wycinek hipokampa do kąpieli pod obiektywem laserowego mikroskopu dwufotonowego. Ciągle perfundować kąpiel nat
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych