JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:01 min. • July 8th, 2025
Weźmy transgeniczne robaki Caenorhabditis elegans rosnące na bloku agaru.
Robaki te wyrażają wskaźnik wapnia, GCaMP5, i niewrażliwe na wapń białko fluorescencyjne, mCherry, w neuronach, które regulują zachowanie związane ze składaniem jaj.
Zamontuj robaki na odwróconym stoliku mikroskopowym.
Wizualizacja fluorescencji GCaMP5 i mCherry.
Przed uwolnieniem komórki jajowej neurony zostają aktywowane, otwierając kanały wapniowe bramkowane napięciem, które umożliwiają napływ wapnia.
Wewnątrzkomórkowy wapń wiąże się z GCaMP5, zmieniając jego konformację i zwiększając fluorescencję.
Tymczasem fluorescencja mCherry pozostaje niezmieniona, co umożliwia śledzenie neuronu.
Aktywowane neurony uwalniają neuroprzekaźniki, które wiążą się z określonymi receptorami mięśniowymi, wywołując uwalnianie komórek jajowych.
Po uwolnieniu kanały wapniowe zamykają się, zmniejszając napływ wapnia i fluorescencję GCaMP5.
Następnie uchwyć obrazy w jasnym polu, aby obserwować ruch robaków.
Zmniejszony ruch występuje z powodu skurczów mięśni przed uwolnieniem jaja.
Po uwolnieniu komórki jajowej mięśnie rozluźniają się, przywracając normalny ruch.
Zmierz współczynnik fluorescencji GCaMP5-mCherry i prędkość robaka,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych