Badania skurczu i relaksacji tętnicy krezkowej z wykorzystaniem zautomatyzowanej miografii drutowej

W tej procedurze wykorzystuje się szczury wrażliwe na sól i odporne na sól do porównania reaktywności tętnic opornych krezkowo pod napięciem fenylefryny z zewnątrzkomórkowym wapniem. Osiąga się to poprzez najpierw odizolowanie arkady krezki od zwierząt i wypreparowanie gałęzi tętnicy oporowej. Następny. Pierwszy z dwóch drutów ze stali nierdzewnej jest przewlekany przez krótki odcinek rozciętej tętnicy, a naczynie jest montowane w komorze grafu.

Następnie drugi drut ze stali nierdzewnej jest przewlekany przez prześwit naczynia równolegle do pierwszego drutu. Następnie zamontowane naczynie jest rozciągane do znormalizowanego obwodu wewnętrznego. Ostatnim krokiem procedury jest reaktywacja naczynia poprzez poddanie go próbie wielokrotnego stosowania fenylefryny i rozluźnienie go za pomocą skumulowanych aplikacji wapnia.

Ostatecznie wyniki pokazują zmiany napięcia w zbiorniku, które można przekształcić w krzywą odpowiedzi wapnia i wykorzystać do wyznaczenia wartości EC 50. Dla porównania. Po raz pierwszy wpadliśmy na pomysł zastosowania tej metody, gdy odkryliśmy, że sieć nev baterii murarskich szczurów wyraża receptor gpro miedź i wapń

Można to badać w taki sam sposób, jak gorzkie receptory AIC, które są aktywowane przez agonistę. Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które dopiero zaczynają korzystać z tej metody, mogą mieć problemy, ponieważ warstwy śródbłonka i mięśni gładkich są małe. Naczynia łatwo ulegają uszkodzeniu.

W takim przypadku właściwości mechaniczne tych naczyń mogą być zagrożone. Aby rozpocząć, przygotuj obszar roboczy i narzędzia chirurgiczne. Połóż znieczulone zwierzę na grzbiecie i przetrzyj brzuch alkoholem.

Po wykonaniu laparotomii w linii środkowej użyj nożyczek, aby usunąć około 85 centymetrów jelita, w tym tętnicę krezkową górną. Przetnij bliższy koniec w pobliżu odźwiernika i dystalny koniec w pobliżu połączenia krętniczo-kątniczego. Umieścić wycięty fragment na powlekanej szalce Petriego zawierającej fizjologiczny roztwór soli lub PSS w temperaturze pokojowej.

Przypnij bliższy koniec jelita po prawej stronie, a następnie przypnij pozostałą część jelita w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara. Następnie wypreparuj odcinek tętnicy krezkowej zawierający gałąź drugą i trzecią oraz kawałek jelita od bliższego końca. Zidentyfikuj punkt rozgałęzienia tętnicy krezkowej w kształcie litery V i odetnij go od żyły.

Użyj kleszczy, aby delikatnie odciągnąć tkankę tłuszczową i łączną, aby uniknąć bezpośredniego kontaktu z tętnicą. Aby rozpocząć montaż naczynia, należy przeciąć dwa odcinki tętnicy o długości około dwóch milimetrów. Końcówka czterocentymetrowego drutu ze stali nierdzewnej o grubości 40 mikrometrów i grubości 40 mikrometrów może być użyta do otwarcia światła tętnicy.

Następnie użyj cienkich kleszczyków, aby wprowadzić drut do światła każdej tętnicy. Uważając, aby nie uszkodzić śródbłonka, wypełnij komorę przeszczepu mięśniowego PSS w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Użyj kleszczyków, aby przenieść gwintowany segment naczynia do komory.

Następnie przenieś wycięty segment naczynia proksymalnego do komory wykresu myo i pociągnij koniec wzdłuż drutu, aby wprowadzić go do naczynia. Unikaj rozciągania naczynia. Zamocuj bliski koniec drutu w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara pod bliską śrubą mocującą na prawej szczęce podłączonej do mikrometru.

Chwyć wolny koniec drutu kleszczami i zabezpiecz go zgodnie z ruchem wskazówek zegara pod dalszą śrubą mocującą na prawej szczęce, upewnij się, że segment naczynia wzdłuż drutu znajduje się w szczelinie między szczękami, nie stykając się z samą szczęką. Rozkręć szczęki. Ustaw drugi drut równolegle do naczynia i włóż go do drugiego końca światła.

Delikatnie przeprowadź drut przez prześwit segmentu naczynia jednym ruchem, używając już zamontowanego drutu jako prowadnicy. Trzymaj drut około jednego centymetra od naczynia, aby uniknąć rozciągania go podczas manewru i unikania dotykania śródbłonka. Skręć szczęki ze sobą i upewnij się, że drugi przewód montażowy przesuwa się pod pierwszym zabezpieczonym po prawej stronie.

Szczęka zabezpiecz bliski koniec drugiego przewodu w kierunku zgodnym z ruchem wskazówek zegara pod bliską śrubą mocującą lewej szczęki podłączonej do przetwornika. Zamocuj drugi koniec drutu pod śrubą mocującą na lewej szczęce i dokręć, aby rozciągnąć drut. Po zakończeniu montażu odczekaj 30 minut na zrównoważenie w temperaturze 37 stopni Celsjusza.

Po zrównoważeniu silnik jest resetowany z menu montażowego i inicjowana jest procedura normalizacji, która rozciąga naczynie do znormalizowanego obwodu wewnętrznego. Aby rozpocząć, otwórz menu normalizacji i ustaw docelowe ciśnienie przezścienne na 13,3 kilopaskala. Następnie ustaw czas trwania każdego z kroków normalizacji na 60 sekund.

Stosunek IC jeden do IC 100 powinien wynosić 0,9, a kalibracja IP powinna być ustawiona na dwie gwiazdy-trójkąty. Zmierz długość zamontowanej tętnicy krezkowej za pomocą odczytów okularu mikroskopu, gdy linie włosów znajdują się nad dali, a neurony segmentu naczynia. Po normalizacji naczynia są reaktywowane poprzez wykonanie standardowego startu składającego się z serii stymulacji i okresów wypłukiwania.

Najpierw załóż pokrywę komory myo i rozpocznij napowietrzanie 95% powietrzem i 5% dwutlenkiem węgla. Napełnij komorę świeżym PSS zawierającym 100 mikromolowy kwas askorbinowy. Skurczyć naczynie pięcioma mikromolowymi koprem włoskim, rine lub PE przez pięć minut i przemyć czterokrotnie buforem PSS Po ostatnim płukaniu ponownie napełnij komorę PSS i odczekaj trzy minuty przed ponownym napełnieniem komory PSS i skurczeniem się z PE.As pokazanymi wcześniej, tętnica jest teraz gotowa do eksperymentu.

Zmierz relaksację skurczonych naczyń poprzez kumulatywne dodawanie rosnących stężeń chlorku wapnia. Poniższa tabela pokazuje, że podstawowe napięcia po zastosowaniu fenylefryny różniły się między szczurami wrażliwymi na sól wistar DS lub lalkami a DR lub odpornymi na sól dla lalek. Ten ślad od szczura Wistar pokazuje rozluźnienie tętnic skurczonych PE przez skumulowane dodawanie relaksacji wapnia z poważnie upośledzonymi tkankami szczurów DS w porównaniu ze szczurami Wistar i w porównaniu ze szczurami Wistar i w porównaniu z Dr.Rats, jak widać tutaj, różnice w wrażliwości na wapń można zaobserwować w krzywych odpowiedzi wapnia i ponownie przy obliczaniu wartości EC 50.

Wreszcie, szczury DS wykazują zmniejszenie ekspresji receptora wyczuwającego wapń w tętnicach w porównaniu z Dr.Rats Once mastered. Tę technikę można wykonać w ciągu dwóch godzin, jeśli zostanie wykonana prawidłowo. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak porównać reaktywność naczyniową małego mięśnia jelitowego ze związkiem egzogennym w warunkach izometrycznych.