Ustalenie konfiguracji cęgów napięciowych całej komórki dla zapisów elektrofizjologicznych w wycinkach mózgu

Weź pipetę rejestracyjną z elektrodą drucianą w roztworze elektrolitu.

Umieść pipetę nad unieruchomionym wycinkiem mózgu.

Dostosuj prąd pipety, aby zredukować sygnały tła.

Użyj mikroskopu, aby zlokalizować neuron docelowy i przesuń pipetę w kierunku neuronu.

Zastosuj lekkie nadciśnienie i zablokuj go.

Nadciśnienie zaburza powierzchnię tkanki, wskazując na bliskość komórki.

Przyłóż pipetę bliżej, aż na membranie utworzy się wgłębienie, wskazujące na prawidłowe umieszczenie.

Zwolnij nadciśnienie.

Obserwuj wzrost oporu, gdy komórka tworzy uszczelkę z pipetą.

Utrzymuj potencjał membrany na stałym ujemnym napięciu, aby zapewnić stabilność.

Odciągnij mikropipetę, aby usunąć nadmierne ciśnienie.

Dostosuj szybkie i wolne reakcje elektryczne pipety, aby uzyskać dokładność.

Zastosuj krótkie ssanie, aby przebić się przez ogniwo, ustanawiając bezpośrednie połączenie elektryczne.

Konfiguracja cęgów napięciowych całego ogniwa jest teraz gotowa do rejestracji elektrofizjologicznej.

Aby uzyskać konfigurację całej komórki, umieść pipetę rejestrującą tuż nad wycinkiem i zrównoważ prąd pipety w trybie Voltage Clamp. Zastosuj lekkie nadciśnienie w pipecie i zablokuj kurek.

Następnie wybierz zdrową kom