Nieinwazyjne podejście do badania elektrofizjologii neuronów ruchowych w zarodkach danio pręgowanego
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:10 min. • July 8th, 2025
Umieść genetycznie zmodyfikowane zarodki danio pręgowanego pod mikroskopem stereoskopowym i obserwuj spontaniczne zwijanie ogona wywoływane przez neurony ruchowe rdzenia kręgowego.
Wewnętrzne właściwości tych neuronów powodują napływ jonów przez kanały sodowe, co prowadzi do spontanicznej depolaryzacji błony i generowania potencjałów czynnościowych, które rozchodzą się do mięśni, wywołując zwijanie ogona. Zmierz częstotliwość zwijania.
Przenieś niektóre zarodki do blokera kanału sodowego, aby zahamować napływ sodu i ocenić zmniejszoną częstotliwość zwijania.
Zamontuj nieleczone zarodki w stopionej agarozie; pozwól agarozie zestalić się, aby ograniczyć ruch, i obserwuj pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Neurony ruchowe wyrażają bioczujnik z domeną wykrywającą napięcie związaną z błoną lub VSD, połączoną z fluoroforami donorowymi i akceptorowymi.
Depolaryzacja zmienia konformację VSD, zbliżając fluorofory.
Po wzbudzeniu donor przekazuje energię do akceptora, powodując emisję fluorescencji akceptora.
Dodaj bloker, aby zahamować depolaryzację, co zmniejsza emisję akceptora, potwierdzając hamowanie spontanicznej depolaryzacji w neuronach za pośrednictwem blokera.
W celu spontanicznej ana
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych