Rejestrowanie aktywności neuronalnej u swobodnie poruszających się myszy za pomocą fotometrii światłowodowej

Zacznij od swobodnie poruszającej się myszy z wszczepioną kaniulą światłowodową.

Podłącz jeden koniec światłowodowego do kaniuli, a drugi koniec do źródła światła wzbudzenia.

Mysz wykazuje ekspresję zielonego, znakowanego fluoroforem, genetycznie kodowanego wskaźnika wapnia (GECI), w bocznym obszarze podwzgórza lub neuronach LHA.

Wszczepiony światłowód styka się z bocznym obszarem habenuli lub LHb, w którym kończą się aksony LHA.

Wzbudzić GECI na optymalnej długości fali wzbudzenia i zarejestrować sygnał linii podstawowej.

Teraz zastosuj powtarzające się podmuchy powietrza do myszy, aby wywołać awersyjną reakcję na stres.

Ten bodziec wyzwala potencjały czynnościowe w końcach aksonów LHA, otwierając kanały wapniowe bramkowane napięciem i umożliwiając napływ wapnia.

Wewnątrzkomórkowe jony wapnia wiążą się z GECI, indukując zmianę konformacyjną, która zwiększa emisję zielonej fluorescencji.

Wizualizacja sygnału optycznego.

Zwiększona fluorescencja w odpowiedzi na zaciągnięcia powietrzem u myszy potwierdza rolę szlaku LHA-LHb w przekazywaniu sygnałów awersyjnych.

Zacznij od sprawdzenia dystalnego końca włókien krosowego na oko i za pomocą mini mikroskopu światłowodowego. Jeśli powierzc