Rejestrowanie aktywności neuronalnej u swobodnie poruszających się myszy za pomocą fotometrii światłowodowej

Zacznij od swobodnie poruszającej się myszy z wszczepioną kaniulą światłowodową.

Podłącz jeden koniec światłowodowego do kaniuli, a drugi koniec do źródła światła wzbudzenia.

Mysz wykazuje ekspresję zielonego, znakowanego fluoroforem, genetycznie kodowanego wskaźnika wapnia (GECI), w bocznym obszarze podwzgórza lub neuronach LHA.

Wszczepiony światłowód styka się z bocznym obszarem habenuli lub LHb, w którym kończą się aksony LHA.

Wzbudzić GECI na optymalnej długości fali wzbudzenia i zarejestrować sygnał linii podstawowej.

Teraz zastosuj powtarzające się podmuchy powietrza do myszy, aby wywołać awersyjną reakcję na stres.

Ten bodziec wyzwala potencjały czynnościowe w końcach aksonów LHA, otwierając kanały wapniowe bramkowane napięciem i umożliwiając napływ wapnia.

Wewnątrzkomórkowe jony wapnia wiążą się z GECI, indukując zmianę konformacyjną, która zwiększa emisję zielonej fluorescencji.

Wizualizacja sygnału optycznego.

Zwiększona fluorescencja w odpowiedzi na zaciągnięcia powietrzem u myszy potwierdza rolę szlaku LHA-LHb w przekazywaniu sygnałów awersyjnych.

Zacznij od sprawdzenia dystalnego końca włókien krosowego na oko i za pomocą mini mikroskopu światłowodowego. Jeśli powierzchnia włókien jest porysowana, ponownie wypoleruj włókna za pomocą folii do polerowania włókien o drobnym ziarnie. Następnie wyczyść dystalne końce krosowego za pomocą 70% etanolu i aplikatora z bawełnianą końcówką. Wyczyść kaniule światłowodowe za pomocą 70% etanolu i aplikatora z bawełnianą końcówką.

Podłącz końcówkę tulejki krosowego do wszczepionego włókna za pomocą ceramicznej dzielonej tulei pokrytej czarną rurką termokurczliwą. Podczas łączenia upewnij się, że tuleja jest szczelna. Pozwól zwierzęciu dojść do siebie przez kilka minut, a następnie rozpocznij nagrywanie sygnału optycznego i przeprowadź eksperyment. Podczas nagrywania uważnie obserwuj ślad na żywo, aby zapewnić jakość nagrań, i uważaj na wszelkie skoki sygnału wskazujące na to, że rękaw nie jest wystarczająco ciasny.