Określanie testowego wpływu hormonu wzrostu na neurony kisspeptyny za pomocą zacisku łatkowego dla całych komórek

Zabezpiecz wycinek podwzgórza transgenicznej myszy w komorze rejestracyjnej wypełnionej płynem CSF.

Wycinek zawiera fluorescencyjne neurony kisspeptyny wyrażające białko fuzyjne, kluczowe dla regulacji układu rozrodczego.

Umieścić mikropipetę składającą się z elektrody rejestrującej w roztworze wewnętrznym.

Mikroskopowo zlokalizuj fluorescencyjny neuron kisspeptyny.

Zastosuj dodatni nacisk na pipetę i przesuń ją w kierunku docelowego neuronu. W kontakcie ciśnienie tworzy wgłębienie w błonie neuronalnej.

Zastosuj krótkie podciśnienie, tworząc uszczelnienie o wysokiej rezystancji między mikropipetą a membraną.

Ustaw napięcie utrzymywania na fizjologicznym potencjale spoczynkowym neuronu, aby uzyskać dokładne pomiary.

Zastosuj krótkie impulsy podciśnienia, aby przełamać membranę, ustanawiając konfigurację całego ogniwa.

Potwierdź żywotność neuronu, monitorując parametry.

Wprowadź testowy hormon wzrostu, wyzwalając szlaki sygnałowe i wywołując zmiany w potencjale błonowym neuronu.

Zmierz zmiany w potencjale błony, aby określić hamujący wpływ hormonu wzrostu na aktywność neuronów.

Przenieś interesujący Cię wycinek mózgu, pojedynczo, do komory nagraniowej za pomocą akrylowej pipety trans