Rejestracja potencjału pola lokalnego w wycinkach kory hipokampowo-śródwęchowej myszy

Zabezpiecz wycinek kory hipokampowo-śródwęchowej myszy w zanurzonej komorze nagraniowej.

Ciągły przepływ natlenionego ACSF w stałej temperaturze, aby utrzymać żywotność tkanek.

Umieść pipetę stymulacyjną wypełnioną roztworem elektrolitu w warstwie promieniowej regionu CA3 hipokampa, zawierającej neurony, które otrzymują informacje z kory śródwęchowej.

Wprowadzić pipetę rejestrującą wypełnioną ACSF do warstwy piramidalnej regionu CA1, składającej się z neuronów tworzących synapsy z wypustkami aksonalnymi z CA3.

Za pomocą pipety stymulacyjnej zastosuj impuls elektryczny, aby wyzwolić potencjały czynnościowe w presynaptycznych neuronach CA3.

Potencjał czynnościowy indukuje uwalnianie neuroprzekaźników, które wiążą się z receptorami na postsynaptycznych neuronach CA1. Wiązanie indukuje napływ jonów, co prowadzi do zmiany potencjału błony.

Połączone zmiany potencjału błonowego wielu postsynaptycznych neuronów CA1, zwane potencjałem pola lokalnego lub LFP, są rejestrowane zewnątrzkomórkowo za pomocą pipety rejestrującej.

Aby zarejestrować lokalne potencjały pola, napełnij 400-mililitrową zlewkę ACSF z pęcherzykami karbogenu i umieść jeden koniec rurki pompy w zlewce. Włącz pompę perystaltyczną z prędkością od ośmiu do 10 mililitrów na minutę, aby skierować ACSF z 400-mililitrowej zlewki do podgrzanego zbiornika, a następnie ze zbiornika do komory rejestrującej w temperaturze 32 stopni Celsjusza.

Następnie na krótko zaciśnij rurkę i wyłącz pompę, aby wstrzymać przepływ. Za pomocą cienkich kleszczy przenieś plasterek tkanki mózgowej do komory nagrywającej za róg papieru do soczewek, na którym spoczywa tkanka, pokrój w dół. Oderwij papier do soczewek, pozostawiając plasterek zanurzony w komorze nagrywania, i użyj harfy, aby zabezpieczyć plasterek.

Za pomocą ręcznego mikromanipulatora powoli wsuń końcówkę pipety stymulacyjnej wypełnionej chlorkiem sodu w powierzchnię plastra pod kątem od 30 do 45 stopni. Następnie za pomocą drugiego mikromanipulatora powoli przesuwaj końcówkę pipety potencjału pola lokalnego wypełnionej ACSF do obszaru zainteresowania pod kątem od 30 do 45 stopni i zarejestruj potencjał pola lokalnego próbki zgodnie ze standardowymi protokołami.