Połączony zapis mechanicznie stymulowanego wydzielania aferentnego i znakowania zakończeń nerwowych w mieszkach włosowych myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:18 min. • July 8th, 2025
Zacznij od wypreparowanej małżowiny usznej myszy lub ucha zewnętrznego, z odsłoniętymi połączonymi nerwami.
Włożyć nerw przeznaczony do nagrywania do elektrody rejestrującej.
Usuń warstwę tłuszczu w pobliżu brzegu małżowiny usznej, aby odsłonić podstawę mieszków włosowych, a następnie złóż skórę, aby odsłonić włosy do stymulacji.
Ustaw sondę do stymulacji mechanicznej tak, aby dotykała i odchylała włosy.
Stymulacja ta aktywuje zakończenia nerwów czuciowych, otwiera mechanicznie bramkowane kanały jonowe, umożliwia napływ jonów dodatnich i generuje potencjały czynnościowe.
Potencjały czynnościowe rozchodzą się przez te zakończenia do rejestrowanego nerwu. Wizualizacja sygnału.
Następnie dodaj farbę fluorescencyjną i kontynuuj stymulację włosów.
Barwnik wiąże się ze stymulowanymi błonami neuronalnymi i jest internalizowany przez endocytozę bez wpływu na aktywność neuronów.
Po stymulacji umyj, aby usunąć niezwiązany barwnik.
Dodaj środek sekwestracyjny, aby usunąć nieinternalizowany barwnik związany z błoną.
Za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej uwidocznij przebarwienia w mieszkach włosowych, aby zidentyfikować mechanicznie stymulowane zakończenia nerwowe.
Aby dokonać kontrolowanych z
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych